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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
pETM30
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
0.5ug
基本信息
名称：pETM-30大肠表达质粒
别称: pETM30
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6346 bp ds-DNA circular SYN 13-8-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6346)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-8-13 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6346
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/mol_type="other DNA"
source 1283..1305
/organism="Enterobacteria phage T7"
/mol_type="genomic DNA"
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terminator 26..73
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
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/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
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/codon_start=1
/product="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and
cleavage site"
/note="TEV site"
/translation="ENLYFQG"
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/codon_start=1
/product="glutathione S-transferase from Schistosoma
japonicum"
/note="GST"
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/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
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/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
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/note="lacI promoter"
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/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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(Geneticin(R)) in eukaryotes"
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ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tccggtacct atgtcataga cacggcaact tgttcgatga
241 agctggccag gtttatatcc cgttcagaaa gaccggcaca ttcgtgggtg ctcaaggtga
301 tatggacctt gttgtacacg ttaaaccact cgggatggtg gtccagcttt tcagcctgca
361 gggcgactct tgtcatgaag ccaaaagccc tgttgaagtc tttaaaatgg aactgtttga
421 agatggcatc tcggccttcc agttcattcc accccacggc ccgcaggttt ggcagcagct
481 ggtcccgttc ctcagcactc agcctgtgtg ccttgccagc catggcgccc tgaaaataaa
541 gattctcgct catccatccg ccaccaccac cagatccact agttggagga tggtcgccac
601 caccaaacgt ggcttgccag ccctgcaaag gccatgctat atacttgctg gatttcaagt
661 acttatcaat ttgtgggata gcttcaatac gttttttaaa acaaactaat tttgggaacg
721 catccaggca cattgggtcc atgtataaaa caacatcaag agcgtcatac aacatgaagt
781 caggatgggt tacatgatca ccatttaaat atgttttatg acataaacga tcttcgaaca
841 ttttcagcat ttcaggtagc ttgctaagaa aatcaacttt gagagtttca aagtctttac
901 tatatgcaat tctcgaaaca ccgtatctaa tatccaaaac cgctccttca agcattgaaa
961 tctctgcacg ctcttttgga caaccaccca acatgttgtg cttgtcagct atataacgta
1021 tgatggccat agactgtgtt aatttaacat caccatcaat ataataagga agattgggaa
1081 actccaaacc caattcaaac tttttgtttc gccatttatc accttcatcg cgctcataca
1141 aatgctcttc atatttttct tcaagatatt ccaaaagaag tcgagtgggt tgcacaaggc
1201 ccttaatttt ccaataacct agtatagggg acatggaatt gctactagtg ttgtgatggt
1261 gatggtgatg tttcatggta tatctccttc ttaaagttaa acaaaattat ttctagaggg
1321 gaattgttat ccgctcacaa ttcccctata gtgagtcgta ttaatttcgc gggatcgaga
1381 tctcgatcct ctacgccgga cgcatcgtgg ccggcatcac cggcgccaca ggtgcggttg
1441 ctggcgccta tatcgccgac atcaccgatg gggaagatcg ggctcgccac ttcgggctca
1501 tgagcgcttg tttcggcgtg ggtatggtgg caggccccgt ggccggggga ctgttgggcg
1561 ccatctcctt gcatgcacca ttccttgcgg cggcggtgct caacggcctc aacctactac
1621 tgggctgctt cctaatgcag gagtcgcata agggagagcg tcgagatccc ggacaccatc
1681 gaatggcgca aaacctttcg cggtatggca tgatagcgcc cggaagagag tcaattcagg
1741 gtggtgaatg tgaaaccagt aacgttatac gatgtcgcag agtatgccgg tgtctcttat
1801 cagaccgttt cccgcgtggt gaaccaggcc agccacgttt ctgcgaaaac gcgggaaaaa
1861 gtggaagcgg cgatggcgga gctgaattac attcccaacc gcgtggcaca acaactggcg
1921 ggcaaacagt cgttgctgat tggcgttgcc acctccagtc tggccctgca cgcgccgtcg
1981 caaattgtcg cggcgattaa atctcgcgcc gatcaactgg gtgccagcgt ggtggtgtcg
2041 atggtagaac gaagcggcgt cgaagcctgt aaagcggcgg tgcacaatct tctcgcgcaa
2101 cgcgtcagtg ggctgatcat taactatccg ctggatgacc aggatgccat tgctgtggaa
2161 gctgcctgca ctaatgttcc ggcgttattt cttgatgtct ctgaccagac acccatcaac
2221 agtattattt tctcccatga agacggtacg cgactgggcg tggagcatct ggtcgcattg
2281 ggtcaccagc aaatcgcgct gttagcgggc ccattaagtt ctgtctcggc gcgtctgcgt
2341 ctggctggct ggcataaata tctcactcgc aatcaaattc agccgatagc ggaacgggaa
2401 ggcgactgga gtgccatgtc cggttttcaa caaaccatgc aaatgctgaa tgagggcatc
2461 gttcccactg cgatgctggt tgccaacgat cagatggcgc tgggcgcaat gcgcgccatt
2521 accgagtccg ggctgcgcgt tggtgcggat atctcggtag tgggatacga cgataccgaa
2581 gacagctcat gttatatccc gccgttaacc accatcaaac aggattttcg cctgctgggg
2641 caaaccagcg tggaccgctt gctgcaactc tctcagggcc aggcggtgaa gggcaatcag
2701 ctgttgcccg tctcactggt gaaaagaaaa accaccctgg cgcccaatac gcaaaccgcc
2761 tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa
2821 agcgggcagt gagcgcaacg caattaatgt aagttagctc actcattagg caccgggatc
2881 tcgaccgatg cccttgagag ccttcaaccc agtcagctcc ttccggtggg cgcggggcat
2941 gactatcgtc gccgcactta tgactgtctt ctttatcatg caactcgtag gacaggtgcc
3001 ggcagcgctc tgggtcattt tcggcgagga ccgctttcgc tggagcgcga cgatgatcgg
3061 cctgtcgctt gcggtattcg gaatcttgca cgccctcgct caagccttcg tcactggtcc
3121 cgccaccaaa cgtttcggcg agaagcaggc cattatcgcc ggcatggcgg ccccacgggt
3181 gcgcatgatc gtgctcctgt cgttgaggac ccggctaggc tggcggggtt gccttactgg
3241 ttagcagaat gaatcaccga tacgcgagcg aacgtgaagc gactgctgct gcaaaacgtc
3301 tgcgacctga gcaacaacat gaatggtctt cggtttccgt gtttcgtaaa gtctggaaac
3361 gcggaagtca gcgccctgca ccattatgtt ccggatctgc atcgcaggat gctgctggct
3421 accctgtgga acacctacat ctgtattaac gaagcgctgg cattgaccct gagtgatttt
3481 tctctggtcc cgccgcatcc ataccgccag ttgtttaccc tcacaacgtt ccagtaaccg
3541 ggcatgttca tcatcagtaa cccgtatcgt gagcatcctc tctcgtttca tcggtatcat
3601 tacccccatg aacagaaatc ccccttacac ggaggcatca gtgaccaaac aggaaaaaac
3661 cgcccttaac atggcccgct ttatcagaag ccagacatta acgcttctgg agaaactcaa
3721 cgagctggac gcggatgaac aggcagacat ctgtgaatcg cttcacgacc acgctgatga
3781 gctttaccgc agctgcctcg cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca
3841 gctcccggag acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca
3901 gggcgcgtca gcgggtgttg gcgggtgtcg gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga
3961 tagcggagtg tatactggct taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac
4021 catatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgct
4081 cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat
4141 cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga
4201 acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt
4261 ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt
4321 ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc
4381 gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa
4441 gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct
4501 ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta
4561 actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg
4621 gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc
4681 ctaactacgg ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pETM-30大肠表达质粒
别称: pETM30
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 6346bp |
| 质粒标签: | N-6×His，N-GST，N-TEV，N-DCOH |
| 原核抗性: | Kan |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BL21(DE3) |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6346 bp ds-DNA circular SYN 13-8-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6346)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-8-13 from MLCC
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FEATURES Location/Qualifiers
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tccggtacct atgtcataga cacggcaact tgttcgatga
241 agctggccag gtttatatcc cgttcagaaa gaccggcaca ttcgtgggtg ctcaaggtga
301 tatggacctt gttgtacacg ttaaaccact cgggatggtg gtccagcttt tcagcctgca
361 gggcgactct tgtcatgaag ccaaaagccc tgttgaagtc tttaaaatgg aactgtttga
421 agatggcatc tcggccttcc agttcattcc accccacggc ccgcaggttt ggcagcagct
481 ggtcccgttc ctcagcactc agcctgtgtg ccttgccagc catggcgccc tgaaaataaa
541 gattctcgct catccatccg ccaccaccac cagatccact agttggagga tggtcgccac
601 caccaaacgt ggcttgccag ccctgcaaag gccatgctat atacttgctg gatttcaagt
661 acttatcaat ttgtgggata gcttcaatac gttttttaaa acaaactaat tttgggaacg
721 catccaggca cattgggtcc atgtataaaa caacatcaag agcgtcatac aacatgaagt
781 caggatgggt tacatgatca ccatttaaat atgttttatg acataaacga tcttcgaaca
841 ttttcagcat ttcaggtagc ttgctaagaa aatcaacttt gagagtttca aagtctttac
901 tatatgcaat tctcgaaaca ccgtatctaa tatccaaaac cgctccttca agcattgaaa
961 tctctgcacg ctcttttgga caaccaccca acatgttgtg cttgtcagct atataacgta
1021 tgatggccat agactgtgtt aatttaacat caccatcaat ataataagga agattgggaa
1081 actccaaacc caattcaaac tttttgtttc gccatttatc accttcatcg cgctcataca
1141 aatgctcttc atatttttct tcaagatatt ccaaaagaag tcgagtgggt tgcacaaggc
1201 ccttaatttt ccaataacct agtatagggg acatggaatt gctactagtg ttgtgatggt
1261 gatggtgatg tttcatggta tatctccttc ttaaagttaa acaaaattat ttctagaggg
1321 gaattgttat ccgctcacaa ttcccctata gtgagtcgta ttaatttcgc gggatcgaga
1381 tctcgatcct ctacgccgga cgcatcgtgg ccggcatcac cggcgccaca ggtgcggttg
1441 ctggcgccta tatcgccgac atcaccgatg gggaagatcg ggctcgccac ttcgggctca
1501 tgagcgcttg tttcggcgtg ggtatggtgg caggccccgt ggccggggga ctgttgggcg
1561 ccatctcctt gcatgcacca ttccttgcgg cggcggtgct caacggcctc aacctactac
1621 tgggctgctt cctaatgcag gagtcgcata agggagagcg tcgagatccc ggacaccatc
1681 gaatggcgca aaacctttcg cggtatggca tgatagcgcc cggaagagag tcaattcagg
1741 gtggtgaatg tgaaaccagt aacgttatac gatgtcgcag agtatgccgg tgtctcttat
1801 cagaccgttt cccgcgtggt gaaccaggcc agccacgttt ctgcgaaaac gcgggaaaaa
1861 gtggaagcgg cgatggcgga gctgaattac attcccaacc gcgtggcaca acaactggcg
1921 ggcaaacagt cgttgctgat tggcgttgcc acctccagtc tggccctgca cgcgccgtcg
1981 caaattgtcg cggcgattaa atctcgcgcc gatcaactgg gtgccagcgt ggtggtgtcg
2041 atggtagaac gaagcggcgt cgaagcctgt aaagcggcgg tgcacaatct tctcgcgcaa
2101 cgcgtcagtg ggctgatcat taactatccg ctggatgacc aggatgccat tgctgtggaa
2161 gctgcctgca ctaatgttcc ggcgttattt cttgatgtct ctgaccagac acccatcaac
2221 agtattattt tctcccatga agacggtacg cgactgggcg tggagcatct ggtcgcattg
2281 ggtcaccagc aaatcgcgct gttagcgggc ccattaagtt ctgtctcggc gcgtctgcgt
2341 ctggctggct ggcataaata tctcactcgc aatcaaattc agccgatagc ggaacgggaa
2401 ggcgactgga gtgccatgtc cggttttcaa caaaccatgc aaatgctgaa tgagggcatc
2461 gttcccactg cgatgctggt tgccaacgat cagatggcgc tgggcgcaat gcgcgccatt
2521 accgagtccg ggctgcgcgt tggtgcggat atctcggtag tgggatacga cgataccgaa
2581 gacagctcat gttatatccc gccgttaacc accatcaaac aggattttcg cctgctgggg
2641 caaaccagcg tggaccgctt gctgcaactc tctcagggcc aggcggtgaa gggcaatcag
2701 ctgttgcccg tctcactggt gaaaagaaaa accaccctgg cgcccaatac gcaaaccgcc
2761 tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa
2821 agcgggcagt gagcgcaacg caattaatgt aagttagctc actcattagg caccgggatc
2881 tcgaccgatg cccttgagag ccttcaaccc agtcagctcc ttccggtggg cgcggggcat
2941 gactatcgtc gccgcactta tgactgtctt ctttatcatg caactcgtag gacaggtgcc
3001 ggcagcgctc tgggtcattt tcggcgagga ccgctttcgc tggagcgcga cgatgatcgg
3061 cctgtcgctt gcggtattcg gaatcttgca cgccctcgct caagccttcg tcactggtcc
3121 cgccaccaaa cgtttcggcg agaagcaggc cattatcgcc ggcatggcgg ccccacgggt
3181 gcgcatgatc gtgctcctgt cgttgaggac ccggctaggc tggcggggtt gccttactgg
3241 ttagcagaat gaatcaccga tacgcgagcg aacgtgaagc gactgctgct gcaaaacgtc
3301 tgcgacctga gcaacaacat gaatggtctt cggtttccgt gtttcgtaaa gtctggaaac
3361 gcggaagtca gcgccctgca ccattatgtt ccggatctgc atcgcaggat gctgctggct
3421 accctgtgga acacctacat ctgtattaac gaagcgctgg cattgaccct gagtgatttt
3481 tctctggtcc cgccgcatcc ataccgccag ttgtttaccc tcacaacgtt ccagtaaccg
3541 ggcatgttca tcatcagtaa cccgtatcgt gagcatcctc tctcgtttca tcggtatcat
3601 tacccccatg aacagaaatc ccccttacac ggaggcatca gtgaccaaac aggaaaaaac
3661 cgcccttaac atggcccgct ttatcagaag ccagacatta acgcttctgg agaaactcaa
3721 cgagctggac gcggatgaac aggcagacat ctgtgaatcg cttcacgacc acgctgatga
3781 gctttaccgc agctgcctcg cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca
3841 gctcccggag acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca
3901 gggcgcgtca gcgggtgttg gcgggtgtcg gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga
3961 tagcggagtg tatactggct taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac
4021 catatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgct
4081 cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat
4141 cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga
4201 acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt
4261 ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt
4321 ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc
4381 gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa
4441 gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct
4501 ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta
4561 actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg
4621 gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc
4681 ctaactacgg ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta
4741 ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg
4801 gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt
4861 tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg
4921 tcatgaacaa taaaactgtc tgcttacata aacagtaata caaggggtgt tatgagccat
4981 attcaacggg aaacgtcttg ctctaggccg cgattaaatt ccaacatgga tgctgattta
5041 tatgggtata aatgggctcg cgataatgtc gggcaatcag gtgcgacaat ctatcgattg
5101 tatgggaagc ccgatgcgcc agagttgttt ctgaaacatg gcaaaggtag cgttgccaat
5161 gatgttacag atgagatggt cagactaaac tggctgacgg aatttatgcc tcttccgacc
5221 atcaagcatt ttatccgtac tcctgatgat gcatggttac tcaccactgc gatccccggg
5281 aaaacagcat tccaggtatt agaagaatat cctgattcag gtgaaaatat tgttgatgcg
5341 ctggcagtgt tcctgcgccg gttgcattcg attcctgttt gtaattgtcc ttttaacagc
5401 gatcgcgtat ttcgtctcgc tcaggcgcaa tcacgaatga ataacggttt ggttgatgcg
5461 agtgattttg atgacgagcg taatggctgg cctgttgaac aagtctggaa agaaatgcat
5521 aaacttttgc cattctcacc ggattcagtc gtcactcatg gtgatttctc acttgataac
5581 cttatttttg acgaggggaa attaataggt tgtattgatg ttggacgagt cggaatcgca
5641 gaccgatacc aggatcttgc catcctatgg aactgcctcg gtgagttttc tccttcatta
5701 cagaaacggc tttttcaaaa atatggtatt gataatcctg atatgaataa attgcagttt
5761 catttgatgc tcgatgagtt tttctaagaa ttaattcatg agcggataca tatttgaatg
5821 tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga
5881 aattgtaaac gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt
5941 ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agaccgagat
6001 agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa
6061 cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccta
6121 atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc
6181 ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc
6241 gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac
6301 acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcccat tcgcca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0063/pMal-c2X大肠表达质粒 |
| P0064/pMal-p2X大肠表达质粒 |
| P1362/pMal-c4X大肠表达质粒 |
| P0347/pMal-c5X大肠表达质粒 |
| P0065/pMal-p5X大肠表达质粒 |
| P0811/pMal-c5E大肠表达质粒 |
| P3012/pMal-T-Avi-His/BirA大肠表达质粒 |
| P0067/pQE-30大肠表达质粒 |
| P0068/pQE-30Xa大肠表达质粒 |
| P4200/pQE-30 UA大肠表达质粒 |
| P0069/pQE-31大肠表达质粒 |
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文献和实验相关实验
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
的表达质粒。A）PCR 扩增的方法U6：来源于人 U6 小核启动子，常用小 RNA 表达，转录本为 shRNA。将 sgRNA 放到 U6 后面，利用 U6 的启动来扩增 sgRNA。将这部分内容整合到 Cas9 expression plasmid pSpCas9（Cas9 表达质粒）中，一起共转。B）sgRNA 表达质粒的方法现在我要用这个方法来举例设计 p53 引物找到包括 sgRNA 序列的前后 1000 个碱基的序列（2000 bp）找到的序列如下：将上面复制的序列粘贴到 blast 中
系统应用最为常见，以CMV启动子构建的pcDNA3能在大多数哺乳动物细胞中高效表达所插入的外源基因，并且是高拷贝数质粒，为大量制备质粒DNA带来了方便。 (1)质粒骨架元件：表达质粒的复制起始位点是质粒自我复制的基础，它确定了在免疫细胞中质粒的拷贝数和质粒DNA的产生数。目前常用的复制起点是大肠杆菌质粒ColEI复制起点，该起点可确保质粒在大肠杆菌细胞中维持20个以上的拷贝数。 (2)启动子和增强子元件：启动子为重要的调控序列，是一段位于转录
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