核酸疫苗载体及表达调控元件
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核酸疫苗载体及表达调控元件
基因免疫 载体常用真核细胞表达质粒，如能在哺乳动物细胞中高效表达真核启动子的质粒，包括长末端重复序列(LTR)、猴空泡病毒(SV40)及巨细胞病毒(CMV)等启动子等。基因免疫载体由3个部分组成：①目的蛋白基因编码序列；②细菌质粒骨架元件，包括复制起点、多克隆位点和选择标记；③转录表达调控元件，包括真核启动子／增强子、转录终止／多聚腺苷酸化信号序列。表达抗原蛋白能力的强弱，取决于其启动子的强弱。目前携带CMV启动子的真核表达质粒系统应用最为常见，以CMV启动子构建的pcDNA3能在大多数哺乳动物细胞中高效表达所插入的外源基因，并且是高拷贝数质粒，为大量制备质粒DNA带来了方便。
(1)质粒骨架元件：表达质粒的复制起始位点是质粒自我复制的基础，它确定了在免疫细胞中质粒的拷贝数和质粒DNA的产生数。目前常用的复制起点是大肠杆菌质粒ColEI复制起点，该起点可确保质粒在大肠杆菌细胞中维持20个以上的拷贝数。
(2)启动子和增强子元件：启动子为重要的调控序列，是一段位于转录起始位点上游负责基因转录、能与RNA聚合酶结合合成mRNA的序列。DNA疫苗中的启动子均为真核启动子，主要由转录起始位点(+1)上游30个碱基对处(-30)及上游80个碱基对处(-80)的两个保守序列组成。目前，在DNA疫苗构建中常用的启动子主要有：①病毒来源的启动子，如猴空泡病毒(SV40)早期启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子、巨细胞病毒早期启动子、腺病毒(ADV)晚期启动子和艾滋病毒长末端重复区启动子等；②哺乳动物细胞来源的启动子，包括p―肌动蛋白基因启动子、金属硫蛋白基因启动子、主要组织相容性复合物基因启动子、肌组织特异性肌球蛋白重链和肌酸激酶基因启动子等。增强子能加强启动子转录能力，具有组织特异性，无方向依赖性，可以远距离发挥作用。
(3)终止子和聚腺苷酸化信号：该序列与目的蛋白的合成和转录有关。目前常用的终止子为病毒基因或细胞基因的3’端序列，如3’端非翻译区终止位点和多聚腺苷酸位点[poly(A)]。
(4)内含子：为增强基因表达的一个元素。研究表明，在作为DNA疫苗的表达载体中加入特点内含子序列，可促进外源基因的表达，并由此提高表达产物及提高免疫应答的强度。
