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- Xybio
- 上海
- P4530
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_152860.2(2同义突变);OI11; OI12; oster
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCMV6-ETV5-m质粒菌种
别称: NM_152860.2(2同义突变);OI11; OI12; oster
复制子: pUC
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
备注: 1296bp
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCR4-TOPO-SP7(human)(2同义突变)
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4006/pCMV-SPORT6-LCMT2人源基因质粒 |
| P4007/pCMV-SPORT6-LRRC40人源基因质粒 |
| P4008/pCMV-SPORT6-RPSA人源基因质粒 |
| P4009/pCMV-SPORT6-MKRN2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4010/pCMV-SPORT6-UCN2人源基因质粒 |
| P4011/pCMV-SPORT6-MOB3A人源基因质粒 |
| P4012/pCMV-SPORT6-MAP7D1（827-2523bp）人源基因质粒 |
| P4013/pCMV-SPORT6-H3F3B人源基因质粒 |
| P4014/pCMV-SPORT6-C14orf80人源基因质粒 |
| P4015/pCMV-SPORT6-NABP1人源基因质粒 |
| P4016/pCMV-SPORT6-SLC16A5（1同义突变）人源基因质粒 |
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文献和实验质粒转染细胞的效率受到多种因素的影响，如细胞的类型，细胞的状态，转染时细胞的密度，转染的方式（电转或化转），DNA 的质量、转染试剂的选择等。从质粒角度来看，超螺旋比例高，且内毒素残留低的质粒会更有利于提高细胞转染的效率。 pCMVβ DNA 用不同试剂盒提取，转染 Huh-7 细胞，转染效率对比 5. 质粒酶切有问题，切不开或者酶切有杂带 酶切切不开可能跟酶本身状态、酶切缓冲液、酶切温度以及质粒本身都有关系。从酶切条件考虑，在确保酶活性的前提下，选择合适的酶切缓冲液、温度
lwjssry 求含有CRE重组酶序列的载体，有如下质粒可交换，或积分交换 表达载体： pcDNA3.1(+) pcDNA3.1/GS pcDNA4HisMax B pIRES2-EGFP pAAV-IRES-hrGFP pBudCE4.1 pEGFP-C1 pEGFP-N1 pCMV-DsRed 腺病毒载体 pADeasy-1,pShuttle，包括菌种
(24:1)，振荡混匀 1 min，12,000 rpm 离心 2 min，将上层水相移至另一离心管中，加入 0.1 倍体积 3M NaAc(pH5.2) 和 2.5 倍体积无水乙醇，置-20 ℃ 沉淀 15~30 min，然后离心 15 min；10. 弃上清，加入 70% 乙醇 ( 注意不要混合)，12000 rpm 离心 10 min；11. 弃上清，真空干燥或自然干燥质粒 DNA；12. 用去离子水溶解质粒 DNA，-20 ℃ 保存备用。（二）质粒的大量制备:1. 将 5 mL 转化菌种
