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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
pCHO1.0
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pCHO1.0哺乳抗体质粒
别称: pCHO1.0
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞,抗体表达载体 |
| 质粒大小: | 12988bp |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | MTX,Puro |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 备注: | 拷贝数较低,构建时需要大提质粒 |
质粒属性
| 载体宿主: | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途: | 蛋白表达,抗体表达 |
| 基因种属: | 空载体 |
| 基因类型: | ORF |
| 原核抗性: | Kan |
| 真核抗性: | Puro |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
pCHO 1.0载体是由ProBioGen AG设计,能够表达一个基因或利用载体上面的杂交CMV启动子共表达2个目的基因。该载体包含有二氢叶酸还原酶(DHFR)选择性标记和嘌呤霉素(puromycin)抗性基因,可以同时使用MTX和嘌呤霉素进行筛选。
质粒图谱
质粒序列:详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P2865/pENTR223-CCDC91-G850A人源基因质粒 |
| P2866/pENTR223-PELI2人源基因质粒 |
| P2867/pENTR223-PHKG2人源基因质粒 |
| P2868/pENTR223-OSGEPL19(34-1278bp1同义突变)人源基因质粒 |
| P2869/pENTR223-MITF-T1234G人源基因质粒 |
| P2870/pENTR223-UBAC1人源基因质粒 |
| P2871/pENTR223-SERBP1-C1108T人源基因质粒 |
| P2872/pENTR223-DCTN2人源基因质粒 |
| P2873/pENTR223-NOL4(343-1611bp)人源基因质粒 |
| P2888/pENTR223-GOT2-T1283C人源基因质粒 |
| P2889/pENTR223-UGCG-G1167T(2同义突变)人源基因质粒 |
| P2890/pENTR223-RMDN2(56-1233bp)人源基因质粒 |
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文献和实验,然后加入临床血清标本,反应后,再吸出标本进行检测。此外,在测定特异IgM时,也可使用抗人IgG去除临床标本中RF和IgG。 (4)测定抗原 时,可在标本中加入可使RF降解的还原剂:如2—巯基乙醇。2—巯基乙醇等还原剂可使抗体内的巯基裂解,因而可以去除RF的干扰,但只适用于抗原测定。 (5)包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体IgY:RF不与鸡IgY反应,如果包被和酶标二抗均为鸡IgY抗体,则不受标本中RF的干扰。 2.补体在固相酶免疫测定中,来自哺乳动物的固相特异
检验,从而保证相应检测项目结果的可靠性及临床应用价值。 (2)改变酶标抗体:由于RF结合的是IgG的Fc片段,如果将待酶标的抗体的F,片段酶切夫除,仅留下具有特异结合功能的F(ab’)2部分标记酶,则在测定中即可避免RF的干扰。 (3)标本中RF用变性IgG预先封闭:将经热变性(63℃,10min)的动物如兔、羊等的IgG加入到标本稀释液中,或是将该变性IgG连接至一颗粒固相如聚苯乙烯微球或微孔,然后加入临床血清标本,反应后,再吸出标本进行检测。此外,在测定特异IgM时,也可使用抗人IgG去除临床
和 Origami 宿主菌的优点于一体。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择,因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Rosetta 宿主菌从 BL21 衍生而来,可增强带有大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。该菌株通过一个相容性氯霉素抗性质粒补充密码子 AUA 、 AGG 、 AGA 、 CUA 、 CCC 和 GGA 的 tRNAs 。这样 Rosetta 菌株提供了“万能”的翻译,从而避免因大肠杆菌密码子使用频率导致的表达限制。 tRNA 基因










