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- Xybio
- 上海
- P1064
- 2025年07月05日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_00127860;DIF;Tnfa;TNF-a;TNFSF2;Tn
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pBV220-TNFα-m小鼠基因质粒
别称: NM_00127860;DIF;Tnfa;TNF-a;TNFSF2;Tn
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：小鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pBV220-TNFα-m质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3872/pCMV-SPORT6-ORC1人源基因质粒 |
| P3873/pCMV-SPORT6-PTPN4人源基因质粒 |
| P3874/pCMV-SPORT6-MAP3K11（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3875/pCMV-SPORT6-MED24（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3876/pCMV-SPORT6-GPT人源基因质粒 |
| P3877/pCMV-SPORT6-PHYHIPL(1点突变）人源基因质粒 |
| P3878/pCMV-SPORT6-DVL2人源基因质粒 |
| P3879/pCMV-SPORT6-GAS2L1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3880/pCMV-SPORT6-LYAR人源基因质粒 |
| P3881/pCMV-SPORT6-GPRASP2人源基因质粒 |
| P3882/pCMV-SPORT6-PSMD3（1点突变1同义突变）人源基因质粒 |
| P3883/pCMV-SPORT6-MLXIPL人源基因质粒 |
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文献和实验1．载体：pBV220为中国预防医学科学院病毒学研究所构建。 2．质粒pUCl8-IL。 3．大肠杆菌JMl03。 （二）培养基 l．LB液体培荞基，LB固体培养基（同实验一）。 2．加氨苄青霉素（Amp）的LB固体培荞基（同实验一）。 （三）试剂 1．酶类： Eco RI、 Bam HI、T 4 DNA连接酶。
用于克隆筛选).因为引物上带了EcoRV位点,又可以进一步做成T载体,再把基因克进去,如此反复... 关键是T载体要制备的好，筛选的时候多挑几个克隆,如果需要定向克隆基因的话可利用载体上的引物筛选之,然后利用基因内部合适的酶切位点来验证... 欢迎交流! qianjing930 我做过三段重复片段的串联,用的是pBV220载体. 第一对引物为EcoRI_KpnI_____BamHI;第一段单体插入pBV220载体中的EcoRI
，在大规模基因表达中优点尤其明显。有些表达载体本身带有CIts857片段，能自身编码CIts蛋白，对宿主的选择范围较宽；另一些表达载体自身不带CIts857片段，选择宿主茵时，要求宿主是有缺陷的原噬菌体溶源化的菌株（如M5219)，前一类载体表达效率往往更高。 载体序列 PBV220载体的全序列 AATTCCCGGGGATCCGTCGACCTGCAGCCAAGCTTCTGTTTTGGCGGATG
