- ￥1300
- 烜雅生物
- XY-ZL0203
- 国产
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
120
- 英文名：
Escherichia coli DH5α(pHY300PLK)
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
冻干粉
英文名称：Escherichia coli DH5α(pHY300PLK)
形式：冻干粉
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：37℃；18-24小时；好氧；
存储条件：2-8℃
安全等级：0
参考用途：pHY300PLK质粒提取
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文献和实验酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 （三）获得含重组表达质粒的表达菌种 1、将连接产物转化大肠杆菌DH5α，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。 2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。 3、以此重组质粒DNA转化表达
法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨
平板（25-50mg/ml），37℃培养16-20hr. 7、次日挑取平板上长出的菌落（选择最小的菌落），接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基，37℃培养10-15hr。 8、碱裂法提取质粒，0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选，大质粒为可能阳性克隆，进一步酶切鉴定。以PacI单酶切，0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段（约30kb），及一条小片段（约3.0或4.5kb）（同时可进行其它酶切鉴定），则基本确定为阳性克隆。 9、取1-5ul 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞（BJ5183
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