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        【分享】温度诱导型原核表达载体pBV220工作原理及全序列

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        7666
        温度诱导型原核表达载体pBV220工作原理及全序列
        实验原理
        PLPR启动子是大肠杆菌l噬菌体中控制早期转录的启动子,具有极强的起始RNA转录的功能,基因工程中常用它来构建高效表达载体,它受抑制物CI蛋白的负调控。在实际中CI蛋白被改造成温度敏感型(CIts),由DNA片段CIts857(857bp长)编码。CIts在30℃时具有抑制启动子的活性,在42℃时失活而失去抑制启动子的活性,因此,改变工程菌的培养温度即可控制目的基因的表达,这一点比用诱导剂诱导表达的系统要节省操作步骤和成本,在大规模基因表达中优点尤其明显。有些表达载体本身带有CIts857片段,能自身编码CIts蛋白,对宿主的选择范围较宽;另一些表达载体自身不带CIts857片段,选择宿主茵时,要求宿主是有缺陷的原噬菌体溶源化的菌株(如M5219),前一类载体表达效率往往更高。

        载体序列
        PBV220载体的全序列
        AATTCCCGGGGATCCGTCGACCTGCAGCCAAGCTTCTGTTTTGGCGGATG
        AGAGAAGATTTTCAGCCTGATACAGATTAAATCAGAACGCAGAAGCGGTC
        TGATAAAACAGAATTTGCCTCCCGGCAGTAGCGCGGTGGTCCCACCTGAC
        CCCATGCCGAACTCAGAAGTGAAACGCCGTAGCGCCGATGGTAGTGTGGG
        GTCTCCCCATGCGAGAGTAGCCAACTGCCAGGCATTAAATAAAACGAAAG
        GCTCAGTCGAAAGACTGGGCCTTTCGTTTTATCTGTTGTTTGTCGGTGAA
        CGCTCTCGTGAGTAGGACAAATCCGCGGGGAGCGGATTTGAACGTTGCGA
        AGCAACGGCCCGGAGGGTGGCGGGCAGGACGCCCGCCATAAACTGCCAGG
        CATCAAATTAAGCAGAAGGCCATCCTGACGGATGGCCTTTTTGCGTTTCT
        ACAAACTCTTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCA
        TGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGT
        ATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATT
        TTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATG
        CTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAAC
        AGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGAT
        GAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACG
        CCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTG
        GTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGT
        AAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCA
        ACTTACTTCTGACAACGATCGGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTT
        GCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGATC
        TGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCA
        ATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGC
        TTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGAC
        CACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCT
        GGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGA
        TGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAA
        CTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATT
        AAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGA
        TTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTG
        ATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCG
        TCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCT
        GCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGG
        TTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGC
        TTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTT
        AGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGC
        TAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACC
        GGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTG
        AACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCG
        AACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAA
        GGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGA
        GCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTG
        TCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCA
        GGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTT
        CCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCC
        CTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCT
        CGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGA
        AGAGCGCCCTTATCTTTCCCTTTATTTTTGCTGCGGTAAGTCGCATAAAA
        ACCATTCTTCATAATTCAATCCATTTACTATGTTATGTTCTGAGGGGAGT
        GAAAATTCCCCTAATTCGATGAAGATTCTTGCTCAATTGTTATCAGCTAT
        GCGCCGACCAGAACACCTTGCCGATCAGCCAAACGTCTCTTCAGGCCACT
        GACTAGCGATAACTTTCCCCACAACGGAACAACTCTCATTGCATGGGATC
        ATTGGGTACTGTGGGTTTAGTGGTTGTAAAAACACCTGACCGCTATCCCT
        GATCAGTTTCTTGAAGGTAAACTCATCACCCCCAAGTCTGGCTATGCAGA
        AATCACCTGGCTCAACAGCCTGCTCAGGGTCAACGAGAATTAACATTCCG
        TCAGGAAAGCTTGGCTTGGAGCCTGTTGGTGCGGTCATGGAATTACCTTC
        AACCTCAAGCCAGAATGCAGAATCACTGGCTTTTTTGGTTGTGCTTACCC
        ATCTCTCCGCATCACCTTTGGTAAAGGTTCTAAGCTCAGGTGAGAACATC
        CCTGCCTGAACATGAGAAAAAACAGGGTACTCATACTCACTTCTAAGTGA
        CGGCTGCATACTAACCGCTTCATACATCTCGTAGATTTCTCTGGCGATTG
        AAGGGCTAAATTCTTCAACGCTAACTTTGAGAATTTTTGCAAGCAATGCG
        GCGTTATAAGCATTTAATGCATTGATGCCATTAAATAAAGCACCAACGCC
        TGACTGCCCCATCCCCATCTTGTCTGCGACAGATTCCTGGGATAAGCCAA
        GTTCATTTTTCTTTTTTTCATAAATTGCTTTAAGGCGACGTGCGTCCTCA
        AGCTGCTCTTGTGTTAATGGTTTCTTTTTTGTGCTCATACGTTAAATCTA
        TCACCGCAAGGGATAAATATCTAACACCGTGCGTGTTGACTATTTTACCT
        CTGGCGGTGATAATGGTTGCATGTACTAAGGAGGTTGTATGGAACAACGC
        ATAACCCTGAAAGATTATGCAATGCGCTTTGGGCAAACCAAGACAGCTAA
        AAGATCTCTCACCTACCAAACAATGCCCCCCTGCAAAAAATAAATTCATA
        TAAAAAACATACAGATAACCATCTGCGGTGATAAATTATCTCTGGCGGTG
        TTGACATAAATACCACTGGCGGTGATACTGAGCACATCAGCAGGACGCAC
        TGACCACCATGAAGGTGACGCTCTTAAAAATTAAGCCCTGAAGAAGGGCA
        GCATTCAAAGCAGAAGGCTTTGGGGTGTGTGATACGAAACGAAGCATTGG
        TTAAAAATTAAGGAG
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