【分享】温度诱导型原核表达载体pBV220工作原理及全序列
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温度诱导型原核表达载体pBV220工作原理及全序列
实验原理
PLPR启动子是大肠杆菌l噬菌体中控制早期转录的启动子，具有极强的起始RNA转录的功能，基因工程中常用它来构建高效表达载体，它受抑制物CI蛋白的负调控。在实际中CI蛋白被改造成温度敏感型(CIts)，由DNA片段CIts857（857bp长）编码。CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活而失去抑制启动子的活性，因此，改变工程菌的培养温度即可控制目的基因的表达，这一点比用诱导剂诱导表达的系统要节省操作步骤和成本，在大规模基因表达中优点尤其明显。有些表达载体本身带有CIts857片段，能自身编码CIts蛋白，对宿主的选择范围较宽；另一些表达载体自身不带CIts857片段，选择宿主茵时，要求宿主是有缺陷的原噬菌体溶源化的菌株（如M5219)，前一类载体表达效率往往更高。
载体序列
PBV220载体的全序列
AATTCCCGGGGATCCGTCGACCTGCAGCCAAGCTTCTGTTTTGGCGGATG
AGAGAAGATTTTCAGCCTGATACAGATTAAATCAGAACGCAGAAGCGGTC
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实验原理
PLPR启动子是大肠杆菌l噬菌体中控制早期转录的启动子，具有极强的起始RNA转录的功能，基因工程中常用它来构建高效表达载体，它受抑制物CI蛋白的负调控。在实际中CI蛋白被改造成温度敏感型(CIts)，由DNA片段CIts857（857bp长）编码。CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活而失去抑制启动子的活性，因此，改变工程菌的培养温度即可控制目的基因的表达，这一点比用诱导剂诱导表达的系统要节省操作步骤和成本，在大规模基因表达中优点尤其明显。有些表达载体本身带有CIts857片段，能自身编码CIts蛋白，对宿主的选择范围较宽；另一些表达载体自身不带CIts857片段，选择宿主茵时，要求宿主是有缺陷的原噬菌体溶源化的菌株（如M5219)，前一类载体表达效率往往更高。
载体序列
PBV220载体的全序列
AATTCCCGGGGATCCGTCGACCTGCAGCCAAGCTTCTGTTTTGGCGGATG
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