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- Xybio
- 上海
- P2296
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#53126
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pGfa2-nLac人源启动子质粒
别称: Plasmid#53126
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：启动子检测
基因种属：人
基因类型：Promoter
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pGfa2-nLac质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3846/pCMV-SPORT6-PYGB人源基因质粒 |
| P3847/pCMV-SPORT6-MSMO1人源基因质粒 |
| P3848/pCMV-SPORT6-SEMA4B人源基因质粒 |
| P3849/pCMV-SPORT6-IP6K1人源基因质粒 |
| P3850/pCMV-SPORT6-ERO1A人源基因质粒 |
| P3851/pCMV-SPORT6-GABRA5（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3852/pCMV-SPORT6-PRRT2人源基因质粒 |
| P3853/pCMV-SPORT6-NPM1人源基因质粒 |
| P3854/pCMV-SPORT6-PAPSS1人源基因质粒 |
| P3855/pCMV-SPORT6-SCARB2人源基因质粒 |
| P3856/pCMV-SPORT6-C8orf79人源基因质粒 |
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文献和实验。这两种方法的优点在于不需要直接操作RNA。4. siRNA表达载体多数的siRNA表达载体依赖3种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹siRNA在哺乳动物细胞中的表达(1–4)。这3类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol III启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。要使用这类载体，需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆到相应载体的pol
shRNA表达质粒多采用RNA聚合酶III启动子，如人源H1或鼠源U6启动子，pol III在哺乳动物细胞（绵羊是哺乳动物）内引导非编码小RNA的转录，转录产物无poly(A)尾，且在转录过程中遇到连续4-5个U时转录终止。此载体最后转录出的产物是经折叠形成的发夹状小RNA(shRNA)； shRNA 在细胞内被Dicer酶切割成3’端带有两个U突出的siRNA，进而启动RNAi，介导基因沉默。载体中的间隔序列为9个核苷酸时最为有效。 是可行的！ 高成胡君
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45―50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子等。采用RNA pol III启动子的原因是由于它有明确的启始和终止序列，总是在离启动子一个固定距离的位置开始转录合成RNA，遇到
