- ￥1200
- 烜雅生物
- XY-ZL0032
- 国产
- 2025年12月18日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
180
- 英文名：
Escherichia coli DH5α(pACYC184)
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
冻干粉
英文名称：Escherichia coli DH5α(pACYC184)
形式：冻干粉
参考用途：科研
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，琼脂：15.0，氯霉素：50μg/mL，pH：7.0(25℃)
生长条件：37℃；18-24h；好氧；
存储条件：2-8℃
安全等级：1
操作步骤：
1. 准备无菌液体试管 1 支（含培养基 5~10mL），90mm 平板 2 块；
2. 安瓿管表面消毒后在安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上 无菌水使之破裂，随后用镊子 将其敲碎；
3. 吸取 0.5mL 液体培养基打入冻干管，充分溶解后重新打回液体试管 中，混匀；
4. 从试管液体中吸取混合液涂布平板，200μL/个；
5. 将试管和平板全部置于上述指定条件培养，禁止密封缠绕平板， 18-24h 后观察培养液明显浑浊，平板菌落或菌苔生长。
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文献和实验酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 （三）获得含重组表达质粒的表达菌种 1、将连接产物转化大肠杆菌DH5α，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。 2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。 3、以此重组质粒DNA转化表达
法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨
臂区域如果 GC 含量过高过低，或者有重复序列，都可能在核酸外切酶切割后形成发卡结构，影响重组效率，可以使用质粒设计软件来检查同源重组臂的设计。 ⑤插入序列本身的问题：有些序列本身存在连接载体困难、连接产物不稳定、连接产物在大肠杆菌中复制困难等问题。对于这类序列可以考虑将序列打断后分步构建，或者更换载体或感受态的方式尝试解决。 2. 质粒提取量不足 质粒提取量少常见的原因可能是： ①摇菌时间过长：大肠杆菌生长已经超过对数期，细菌老化，导致细胞和 DNA 降解。 ②摇菌时间不足：细菌生长不充分
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