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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#8454;VSVG
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCMV-VSV-G慢病毒包装质粒
别称: Plasmid#8454;VSVG
质粒属性
质粒简介
pCMV-VSV-G expresses the G glycoprotein of the vesicular stomatitis virus (VSV-G) under the control of the CMV immediate-early promoter. VSV-G is used in pseudotyping of Moloney Murine Leukenia Virus (MMLV)-based retroviral vectors by mediating viral entry. VSV-G interacts with phospholipid components of the target cell membrane and fosters the fusion of viral and cellular membranes. VSV-G does not require a cell surface receptor and can serve as a surrogate viral envelope protein
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6507 bp ds-DNA circular SYN 31-八月-2017
KEYWORDS pCMV-VSV-G
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6507)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2017年8月31日 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6507
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/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(206..794)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(965..1825)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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LIKHW"
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/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
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/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
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/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
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/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
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/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 3413..3985
/note="beta-globin intron"
/note="intron from rabbit beta-globin gene"
CDS 4071..5606
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/gene="
"
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/note="VSV-G"
/note="Indiana strain"
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"
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polyA_site 5898..5953
/note="beta-globin poly(A) signal"
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ORIGIN
1 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
61 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
121 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
181 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
241 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt
301 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
361 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc
421 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
481 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact
541 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg
601 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta
661 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca
721 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa
781 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg
841 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc
901 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg
961 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat
1021 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg
1081 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa
1141 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca
1201 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc
1261 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
1321 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa
1381 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat
1441 cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct
1501 tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga
1561 gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag
1621 tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga
1681 gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca
1741 ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg
1801 cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc
1861 agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag
1921 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctaaatt gtaagcgtta atattttgtt
1981 aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg
2041 caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg
2101 gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta
2161 tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg
2221 ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa
2281 gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct
2341 ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct
2401 acagggcgcg tcccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg
2461 ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg
2521 ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg agcgcgcgta
2581 atacgactca ctatagggcg aattggagct ccaccgcggt ggcggccgct ctagagagct
2641 tggcccattg catacgttgt atccatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
2701 aacattaccg ccatgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
2761 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
2821 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
2881 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
2941 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga
3001 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg
3061 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat
3121 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
3181 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc
3241 cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
3301 tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag acgccatcca cgctgttttg acctccatag
3361 aagacaccgg gaccgatcca gcctccggtc gaccgatcct gagaacttca gggtgagttt
3421 ggggaccctt gattgttctt tctttttcgc tattgtaaaa ttcatgttat atggaggggg
3481 caaagttttc agggtgttgt ttagaatggg aagatgtccc ttgtatcacc atggaccctc
3541 atgataattt tgtttctttc actttctact ctgttgacaa ccattgtctc ctcttatttt
3601 cttttcattt tctgtaactt tttcgttaaa ctttagcttg catttgtaac gaatttttaa
3661 attcactttt gtttatttgt cagattgtaa gtactttctc taatcacttt tttttcaagg
3721 caatcagggt atattatatt gtacttcagc acagttttag agaacaattg ttataattaa
3781 atgataaggt agaatatttc tgcatataaa ttctggctgg cgtggaaata ttcttattgg
3841 tagaaacaac tacaccctgg tcatcatcct gcctttctct ttatggttac aatgatatac
3901 actgtttgag atgaggataa aatactctga gtccaaaccg ggcccctctg ctaaccatgt
3961 tcatgccttc ttctctttcc tacagctcct gggcaacgtg ctggttgttg tgctgtctca
4021 tcattttggc aaagaattcc tcgacggatc cctcgaggaa ttctgacact atgaagtgcc
4081 ttttgtactt agccttttta ttcattgggg tgaattgcaa gttcaccata gtttttccac
4141 acaaccaaaa aggaaactgg aaaaatgttc cttctaatta ccattattgc ccgtcaagct
4201 cagatttaaa ttggcataat gacttaatag gcacagcctt acaagtcaaa atgcccaaga
4261 gtcacaaggc tattcaagca gacggttgga tgtgtcatgc ttccaaatgg gtcactactt
4321 gtgatttccg ctggtatgga ccgaagtata taacacattc catccgatcc ttcactccat
4381 ctgtagaaca atgcaaggaa agcattgaac aaacgaaaca aggaacttgg ctgaatccag
4441 gcttccctcc tcaaagttgt ggatatgcaa ctgtgacgga tgccgaagca gtgattgtcc
4501 aggtgactcc tcaccatgtg ctggttgatg aatacacagg agaatgggtt gattcacagt
4561 tcatcaacgg aaaatgcagc aattacatat gccccactgt ccataactct acaacctggc
4621 attctgacta taaggtcaaa gggctatgtg attctaacct catttccatg gacatcacct
4681 tcttctcaga ggacggagag ctatcatccc tgggaaagga gggcacaggg ttcagaagta
4741 actactttgc ttatgaaact ggaggcaagg cctgcaaaat gcaatactgc aagcattggg
4801 gagtcagact cccatcaggt gtctggttcg agatggctga taaggatctc tttgctgcag
4861 ccagattccc tgaatgccca gaagggtcaa gtatctctgc tccatctcag acctcagtgg
4921 atgtaagtct aattcaggac gttgagagga tcttggatta ttccctctgc caagaaacct
4981 ggagcaaaat cagagcgggt cttccaatct ctccagtgga tctcagctat cttgctccta
5041 aaaacccagg aaccggtcct gctttcacca taatcaatgg taccctaaaa tactttgaga
5101 ccagatacat cagagtcgat attgctgctc caatcctctc aagaatggtc ggaatgatca
5161 gtggaactac cacagaaagg gaactgtggg atgactgggc accatatgaa gacgtggaaa
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCMV-VSV-G慢病毒包装质粒
别称: Plasmid#8454;VSVG
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | β-globin poly(A) |
| 质粒分类: | 病毒系列，慢病毒包装载体 |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 包装辅助 |
| 基因种属： | 病毒 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
pCMV-VSV-G expresses the G glycoprotein of the vesicular stomatitis virus (VSV-G) under the control of the CMV immediate-early promoter. VSV-G is used in pseudotyping of Moloney Murine Leukenia Virus (MMLV)-based retroviral vectors by mediating viral entry. VSV-G interacts with phospholipid components of the target cell membrane and fosters the fusion of viral and cellular membranes. VSV-G does not require a cell surface receptor and can serve as a surrogate viral envelope protein
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6507 bp ds-DNA circular SYN 31-八月-2017
KEYWORDS pCMV-VSV-G
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6507)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2017年8月31日 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6507
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replication"
CDS complement(965..1825)
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indicates direction of (+) strand synthesis"
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enhancer 2718..3097
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/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
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intron 3413..3985
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"
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ORIGIN
1 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
61 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
121 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
181 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
241 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt
301 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
361 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc
421 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
481 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact
541 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg
601 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta
661 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca
721 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa
781 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg
841 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc
901 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg
961 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat
1021 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg
1081 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa
1141 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca
1201 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc
1261 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
1321 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa
1381 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat
1441 cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct
1501 tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga
1561 gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag
1621 tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga
1681 gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca
1741 ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg
1801 cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc
1861 agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag
1921 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctaaatt gtaagcgtta atattttgtt
1981 aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg
2041 caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg
2101 gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta
2161 tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg
2221 ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa
2281 gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct
2341 ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct
2401 acagggcgcg tcccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg
2461 ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg
2521 ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg agcgcgcgta
2581 atacgactca ctatagggcg aattggagct ccaccgcggt ggcggccgct ctagagagct
2641 tggcccattg catacgttgt atccatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
2701 aacattaccg ccatgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
2761 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
2821 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
2881 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
2941 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga
3001 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg
3061 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat
3121 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
3181 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc
3241 cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
3301 tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag acgccatcca cgctgttttg acctccatag
3361 aagacaccgg gaccgatcca gcctccggtc gaccgatcct gagaacttca gggtgagttt
3421 ggggaccctt gattgttctt tctttttcgc tattgtaaaa ttcatgttat atggaggggg
3481 caaagttttc agggtgttgt ttagaatggg aagatgtccc ttgtatcacc atggaccctc
3541 atgataattt tgtttctttc actttctact ctgttgacaa ccattgtctc ctcttatttt
3601 cttttcattt tctgtaactt tttcgttaaa ctttagcttg catttgtaac gaatttttaa
3661 attcactttt gtttatttgt cagattgtaa gtactttctc taatcacttt tttttcaagg
3721 caatcagggt atattatatt gtacttcagc acagttttag agaacaattg ttataattaa
3781 atgataaggt agaatatttc tgcatataaa ttctggctgg cgtggaaata ttcttattgg
3841 tagaaacaac tacaccctgg tcatcatcct gcctttctct ttatggttac aatgatatac
3901 actgtttgag atgaggataa aatactctga gtccaaaccg ggcccctctg ctaaccatgt
3961 tcatgccttc ttctctttcc tacagctcct gggcaacgtg ctggttgttg tgctgtctca
4021 tcattttggc aaagaattcc tcgacggatc cctcgaggaa ttctgacact atgaagtgcc
4081 ttttgtactt agccttttta ttcattgggg tgaattgcaa gttcaccata gtttttccac
4141 acaaccaaaa aggaaactgg aaaaatgttc cttctaatta ccattattgc ccgtcaagct
4201 cagatttaaa ttggcataat gacttaatag gcacagcctt acaagtcaaa atgcccaaga
4261 gtcacaaggc tattcaagca gacggttgga tgtgtcatgc ttccaaatgg gtcactactt
4321 gtgatttccg ctggtatgga ccgaagtata taacacattc catccgatcc ttcactccat
4381 ctgtagaaca atgcaaggaa agcattgaac aaacgaaaca aggaacttgg ctgaatccag
4441 gcttccctcc tcaaagttgt ggatatgcaa ctgtgacgga tgccgaagca gtgattgtcc
4501 aggtgactcc tcaccatgtg ctggttgatg aatacacagg agaatgggtt gattcacagt
4561 tcatcaacgg aaaatgcagc aattacatat gccccactgt ccataactct acaacctggc
4621 attctgacta taaggtcaaa gggctatgtg attctaacct catttccatg gacatcacct
4681 tcttctcaga ggacggagag ctatcatccc tgggaaagga gggcacaggg ttcagaagta
4741 actactttgc ttatgaaact ggaggcaagg cctgcaaaat gcaatactgc aagcattggg
4801 gagtcagact cccatcaggt gtctggttcg agatggctga taaggatctc tttgctgcag
4861 ccagattccc tgaatgccca gaagggtcaa gtatctctgc tccatctcag acctcagtgg
4921 atgtaagtct aattcaggac gttgagagga tcttggatta ttccctctgc caagaaacct
4981 ggagcaaaat cagagcgggt cttccaatct ctccagtgga tctcagctat cttgctccta
5041 aaaacccagg aaccggtcct gctttcacca taatcaatgg taccctaaaa tactttgaga
5101 ccagatacat cagagtcgat attgctgctc caatcctctc aagaatggtc ggaatgatca
5161 gtggaactac cacagaaagg gaactgtggg atgactgggc accatatgaa gacgtggaaa
5221 ttggacccaa tggagttctg aggaccagtt caggatataa gtttccttta tacatgattg
5281 gacatggtat gttggactcc gatcttcatc ttagctcaaa ggctcaggtg ttcgaacatc
5341 ctcacattca agacgctgct tcgcaacttc ctgatgatga gagtttattt tttggtgata
5401 ctgggctatc caaaaatcca atcgagcttg tagaaggttg gttcagtagt tggaaaagct
5461 ctattgcctc ttttttcttt atcatagggt taatcattgg actattcttg gttctccgag
5521 ttggtatcca tctttgcatt aaattaaagc acaccaagaa aagacagatt tatacagaca
5581 tagagatgaa ccgacttgga aagtaactca aatcctgcac aacagattct tcatgtttgg
5641 accaaatcaa cttgtgatac catgctcaaa gaggcctcaa ttatatttga gtttttaatt
5701 tttatgaaaa aaaaaaaaaa aaacggaatt cctcgaggga tccgtcgagg aattcactcc
5761 tcaggtgcag gctgcctatc agaaggtggt ggctggtgtg gccaatgccc tggctcacaa
5821 ataccactga gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga
5881 gcatctgact tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt
5941 tttgtgtctc tcactcggaa ggacatatgg gagggcaaat catttaaaac atcagaatga
6001 gtatttggtt tagagtttgg caacatatgc ccatatgctg gctgccatga acaaaggttg
6061 gctataaaga ggtcatcagt atatgaaaca gccccctgct gtccattcct tattccatag
6121 aaaagccttg acttgaggtt agattttttt tatattttgt tttgtgttat ttttttcttt
6181 aacatcccta aaattttcct tacatgtttt actagccaga tttttcctcc tctcctgact
6241 actcccagtc atagctgtcc ctcttctctt atggagatcc ctcgacggat cggccgcaat
6301 tcgtaatcat gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca
6361 acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca
6421 cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc
6481 attaatgaat cggccaacgc gcgggga
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0625/pENTR223-DUSP6人源基因质粒 |
| P0628/pENTR223-EGFlAM人源基因质粒 |
| P1186/pENTR223-RBM4人源基因质粒 |
| P1203/pENTR223-OSBPL2人源基因质粒 |
| P0616/pENTR223-DRD2人源基因质粒 |
| P0617/pENTR223-DRD3人源基因质粒 |
| P0605/pENTR223-LTF人源基因质粒 |
| P0608/pENTR223-REN人源基因质粒 |
| P0631/pENTR223-HLA-B人源基因质粒 |
| P1776/pENTR223-TMEM234-G139C人源基因质粒 |
| P1777/pENTR223-LINC00051人源基因质粒 |
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