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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
15
- 英文名:
GOMO-GFP
- 保质期:
2年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
质粒干粉
英文名称:GOMO-GFP
形式:质粒干粉
参考用途:疟原虫基因打靶
培养基:酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,pH:7.0(25℃)
生长条件:LB +氨苄青霉素,37℃(克隆菌株Stbl3,11659bp)
存储条件:2-8℃
安全等级:1
操作步骤:
1.溶解: 收到质粒干粉后,请加入 20μl 无菌水至管底,溶解质粒,室温静置 1min;
2.混合(吸附质粒): 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀,冰上放置 30min;
3.热激导入: 42℃静置 90s;
4.收缩膜孔: 冰浴 2min;
5.修复培养: 毎管加 800µl LB 液体培养基,37 ℃培养 1h 150 r/min;
6.筛选培养: 将适当体积(100 µl)的复苏细胞,涂布在相应抗性的 LB 平板上,正置平皿 30min(琼脂面务必干燥后), 倒置培养 12-16h,出现菌落。
7.提取: 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中,震荡培养 12-16h,根据试验需要提取质粒。
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文献和实验【求助】用带GFP标签的microRNA质粒能用于luciferase实验吗?
dlh110 我构建了个microRNA的带GFP标签的质粒,不知道能不能与目的基因的3’UTR luciferase报告载体共转来检测luciferase的活性? bigbang_0_0 这个实验还要谨慎考虑一下,GFP的绿色荧光可能会干扰luciferase检测结果。 另外你说的microRNA带GFP标签,你要保证两个东西都要有表达且保持活性,建议你最好把这两个东西构建成两个转录单位,由两个启动
-GFP 等)以及其他应用的质粒。根据质粒的拷贝数不同,又可以分为高拷贝质粒(质粒可以在细胞内复制成几百个拷贝)和低拷贝质粒(质粒在细胞内只有<20 个拷贝)。质粒的拷贝数通常受到复制子的调控。 质粒上通常会带有多种元件,例如,复制起始位点(ORI),抗性基因,多克隆位点,启动子,终止子,标签序列等等。质粒上至少要带有复制位点(ORI),否则无法进行复制;除了一些特殊质粒(如 minicircle plasmid)之外,绝大多数质粒都带有抗性基因,用于抗生素筛选。多克隆位点可以通过酶切,酶连或者同源
liuruya 问别人要了个带GFP-tag(GFP-N2载体)的质粒,目的基因1.4kb,分子量约52kD,转染293T细胞能见荧光,WB杂不出来,设置了阴性和阳性对照证实不是WB的技术问题。后来又换了个flag-tag,仍然杂不出来WB。仔细检查过序列,不存在移码的问题,非常费解。有同学分析是空间位阻问题,不知换个tag是不是能解决这个问题。有同学遇到过这种问题么,或者帮忙分析一下可能的原因。谢谢!!! zhuqueleee
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