pEGFP-FAK人源基因质粒

基本信息
名称：pEGFP-FAK人源基因质粒
别称: NM_205435.1;PTK2;FADK;FAK1;FRNK;PPP1
启动子:  CMV
复制子: pUC
质粒分类:  基因文库质粒
原核抗性: Kan
筛选标记:  G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：鸡
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色

质粒简介
      pEGFP-FAK(NM_001199649.1)是一个鸡源ORF基因哺乳细胞表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7874 bp ds-DNA     circular SYN 18-OCT-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7874
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        61..364
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        365..568
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     regulatory      607..616
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             613..1329
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced GFP"
                     /label=EGFP
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     CDS             1345..4506
                     /codon_start=1
                     /label=FAK
                     /translation="MAAAYLDPNLNHTPSSSAKTHLGTGMERSPGAMERVLKVFHYFEN
                     SSEPTTWASIIRHGDATDVRGIIQKIVDCHKVKNVACYGLRLSHLQSEEVHWLHLDMGV
                     SNVREKFELAHPPEEWKYELRIRYLPKGFLNQFTEDKPTLNFFYQQVKNDYMLEIADQV
                     DQEIALKLGCLEIRRSYGEMRGNALEKKSNYEVLEKDVGLRRFFPKSLLDSVKAKTLRK
                     LIQQTFRQFANLNREESILKFFEILSPVYRFDKECFKCALGSSWIISVELAIGPEEGIS
                     YLTDKGANPTHLADFNQVQTIQYSNSEDKDRKGMLQLKIAGAPEPLTVTAPSLTIAENM
                     ADLIDGYCRLVNGATQSFIIRPQKEGERALPSIPKLANNEKQGVRSHTVSVSETDDYAE
                     IIDEEDTYTMPSTRDYEIQRERIELGRCIGEGQFGDVHQGIYMSPENPAMAVAIKTCKN
                     CTSDSVREKFLQEALTMRQFDHPHIVKLIGVITENPVWIIMELCTLGELRSFLQVRKFS
                     LDLASLILYAYQLSTALAYLESKRFVHRDIAARNVLVSATDCVKLGDFGLSRYMEDSTY
                     YKASKGKLPIKWMAPESINFRRFTSASDVWMFGVCMWEILMHGVKPFQGVKNNDVIGRI
                     ENGERLPMPPNCPPTLYSLMTKCWAYDPSRRPRFTELKAQLSTILEEEKLQQEERMRME
                     SRRQVTVSWDSGGSDEAPPKPSRPGYPSPRSSEGFYPSPQHMVQPNHYQVSGYSGSHGI
                     PAMAGSIYPGQASLLDQTDSWNHRPQEVSAWQPNMEDSGTLDVRGMGQVLPTHLMEERL
                     IRQQQEMEEDQRWLEKEERFLVMKPDVRLSRGSIEREDGGLQGPAGNQHIYQPVGKPDH
                     AAPPKKPPRPGAPHLGSLASLNSPVDSYNEGVKIKPQEISPPPTANLDRSNDKVYENVT
                     GLVKAVIEMSSKIQPAPPEEYVPMVKEVGLALRTLLATVDESLPVLPASTHREIEMAQK
                     LLNSDLAELINKMKLAQQYVMTSLQQEYKKQMLTAAHALAVDAKNLLDVIDQARLKMIS
                     QSRPH"
     polyA_signal    4662..4783
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(4790..5245)
                     /direction=LEFT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        5272..5376
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     promoter        5378..5735
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      5586..5721
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             5770..6564
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=NeoR/KanR
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    6796..6843
                     /label=HSV TK poly(A) signal
                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase 
                     polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
     rep_origin      7172..7760
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
       61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
      121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
      181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
      241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
      301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
      361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
      421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
      481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
      541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
      601 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg
      661 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc
      721 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg
      781 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc
      841 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag
      901 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag
      961 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac
     1021 atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac
     1081 aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc
     1141 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg
     1201 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc
     1261 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag
     1321 ctgtacaagt ccggactcag atccatggca gcagcttacc ttgatccaaa cttgaatcat
     1381 acaccaagtt caagtgcaaa gacgcacctc ggtactggga tggagcgttc cccgggggcc
     1441 atggagcgag tcctaaaggt ttttcactac tttgaaaaca gcagcgagcc aacgacgtgg
     1501 gccagcatta tccggcatgg agatgctact gatgttcgag gcataataca gaagattgtg
     1561 gactgtcaca aagtgaaaaa tgtggcctgc tatgggttgc gactcagtca tctgcagtct
     1621 gaggaggttc actggctgca cctggacatg ggggtatcca atgtgagaga gaaatttgaa
     1681 ctagcacatc ctccagaaga atggaaatat gaactgagaa ttcggtacct gcccaaagga
     1741 tttctaaacc agttcactga ggacaaacca actttaaatt ttttctatca gcaggtgaaa
     1801 aatgactata tgttagaaat agcagatcaa gtggaccagg aaattgcttt gaaactaggt
     1861 tgccttgaaa tcaggagatc ctacggagag atgagaggca atgcattaga gaagaaatcc
     1921 aactatgaag tgctagaaaa agatgtcggt ttaagacgat tttttccgaa gagtttgcta
     1981 gattcagtga aggccaaaac actacgaaaa ttaatccaac agacatttcg acaatttgcc
     2041 aacctcaaca gagaagaaag tattttgaaa ttctttgaga tcctctctcc agtgtacaga
     2101 tttgacaagg aatgcttcaa gtgtgccctt ggttcaagct ggattatttc agtggagctg
     2161 gcaattggcc cagaggaagg aatcagctac cttacagaca agggtgcaaa tccaactcac
     2221 ctggcagatt ttaatcaagt acaaactatt cagtattcaa acagtgaaga caaggacaga
     2281 aaagggatgt tgcaactgaa gatagctggt gcacctgagc ctctgacagt gacagcacca
     2341 tccttaacca ttgcagagaa tatggctgac ttgatagacg gatactgccg actggtgaat
     2401 ggagccacgc aatcttttat tatcaggcca cagaaagaag gtgaaagagc tttaccatca
     2461 ataccaaagc tggccaacaa tgagaagcaa ggagtaaggt cgcacacagt ctctgtatca
     2521 gaaacagatg actatgcaga gataatagat gaagaagata cttatacaat gccatcaacc
     2581 agagattatg aaattcaaag ggagagaatt gaactggggc gctgcattgg tgaaggacag
     2641 tttggagatg tgcaccaagg aatttacatg agtccggaaa atccagctat ggctgtagca
     2701 atcaaaacat gtaaaaactg cacctcagac agcgttagag aaaagttcct acaagaagcc
     2761 ttaacaatgc gtcagtttga tcatcctcac attgtgaagc tcattggagt tattacagaa
     2821 aacccagtgt ggataatcat ggagctctgt acacttggag agttgagatc gtttctgcaa
     2881 gtaagaaaat tcagcttgga cctggcctcc ctcatcctct acgcttacca gcttagcaca
     2941 gcacttgctt acctagagag caaaagattt gtacatagag atattgctgc taggaacgtg
     3001 ctggtatctg ccactgactg tgtgaaattg ggtgactttg gcttatcccg atacatggaa
     3061 gacagtactt actataaagc ttccaaagga aagttaccta tcaaatggat ggctccagag
     3121 tcaatcaact tccgacggtt tacctcagca agcgatgtgt ggatgtttgg tgtgtgtatg
     3181 tgggagatcc tgatgcatgg ggtaaagccc ttccagggag tgaaaaataa tgatgttatt
     3241 ggtcggattg agaacggtga gcggctcccc atgcctccga actgccctcc caccctctac
     3301 agccttatga ccaagtgctg ggcatacgac cctagtagac gacccaggtt tactgaactt
     3361 aaagcacaac tcagtacaat actggaggag gagaagctgc agcaagagga acgaatgaga
     3421 atggaatcca ggcgacaagt cacagtatcc tgggactcag gaggatcaga tgaagctcct
     3481 cccaagccca gcaggcctgg ttaccccagc ccaaggtcca gtgaagggtt ttatccgagt
     3541 cctcagcata tggtacagcc aaatcactac caggtatctg gctactctgg ttctcatggg
     3601 ataccagcca tggcaggcag catttatcct gggcaagctt ctctcttgga tcaaacagat
     3661 tcctggaacc atcgacctca ggaagtatca gcatggcagc caaacatgga ggattcgggc
     3721 actttggatg tacgaggaat ggggcaggtt ctgcccacac atctcatgga ggagaggtta
     3781 ataagacaac agcaagagat ggaagaagat caacgctggc ttgagaaaga ggaacgattc
     3841 ctggtaatga aacctgatgt gcggctctcc agaggcagca ttgaacggga ggacggaggt
     3901 ctccagggcc cagctggtaa ccagcacata tatcagcctg tgggtaaacc agatcatgcc
     3961 gctccaccaa agaagccccc tcgccctgga gccccccact tgggcagcct cgcgagcctg
     4021 aacagccccg tggacagcta caacgaaggc gtgaagatca agccacagga aatcagccct
     4081 cctcctacgg ccaacctgga ccgctccaat gacaaagtct atgagaatgt aaccgggctg
     4141 gtgaaagctg tcatagagat gtccagtaaa atacagccag ctccgccaga ggagtacgtg
     4201 cccatggtaa aggaggttgg cttggcgctg agaaccttgc tagcaacagt ggatgagtcg
     4261 ctgccagtgc ttcctgcaag cacccacaga gagattgaga tggcccagaa actgctgaac
     4321 tctgacctgg ctgagctcat taacaagatg aagctggccc agcagtacgt catgaccagc
     4381 ctgcagcagg agtacaagaa gcaaatgctg acggctgctc acgctctggc tgtggatgcc
     4441 aagaacttgc tggatgtcat cgatcaagcc agactgaaaa tgatcagcca gtccaggccc
     4501 cactaagctg ccgtagccga attctgcaga tgggatccac cggatctaga taactgatca
     4561 taatcagcca taccacattt gtagaggttt tacttgcttt aaaaaacctc ccacacctcc
     4621 ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa ttgttgttgt taacttgttt attgcagctt
     4681 ataatggtta caaataaagc aatagcatca caaatttcac aaataaagca tttttttcac
     4741 tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca tcaatgtatc ttaacgcgta aattgtaagc
     4801 gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt ttttaaccaa
     4861 taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agaccgagat agggttgagt
     4921 gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa cgtcaaaggg
     4981 cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccta atcaagtttt
     5041 ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc ccgatttaga
     5101 gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc gaaaggagcg
     5161 ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac acccgccgcg
     5221 cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcaggt ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc
     5281 cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc
     5341 tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtcctg aggcggaaag aaccagctgt
     5401 ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc
     5461 aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag
     5521 gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac catagtcccg cccctaactc
     5581 cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa
     5641 ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt
     5701 gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt gcaaagatcg atcaagagac aggatgagga
     5761 tcgtttcgca tgattgaaca agatggattg cacgcaggtt ctccggccgc ttgggtggag
     5821 aggctattcg gctatgactg ggcacaacag acaatcggct gctctgatgc cgccgtgttc
     5881 cggctgtcag cgcaggggcg cccggttctt tttgtcaaga ccgacctgtc cggtgccctg
     5941 aatgaactgc aagacgaggc agcgcggcta tcgtggctgg ccacgacggg cgttccttgc
     6001 gcagctgtgc tcgacgttgt cactgaagcg ggaagggact ggctgctatt gggcgaagtg
     6061 ccggggcagg atctcctgtc atctcacctt gctcctgccg agaaagtatc catcatggct
     6121 gatgcaatgc ggcggctgca tacgcttgat ccggctacct gcccattcga ccaccaagcg
     6181 aaacatcgca tcgagcgagc acgtactcgg atggaagccg gtcttgtcga tcaggatgat
     6241 ctggacgaag agcatcaggg gctcgcgcca gccgaactgt tcgccaggct caaggcgagc
     6301 atgcccgacg gcgaggatct cgtcgtgacc catggcgatg cctgcttgcc gaatatcatg
     6361 gtggaaaatg gccgcttttc tggattcatc gactgtggcc ggctgggtgt ggcggaccgc
     6421 tatcaggaca tagcgttggc tacccgtgat attgctgaag agcttggcgg cgaatgggct
     6481 gaccgcttcc tcgtgcttta cggtatcgcc gctcccgatt cgcagcgcat cgccttctat
     6541 cgccttcttg acgagttctt ctgagcggga ctctggggtt cgaaatgacc gaccaagcga
     6601 cgcccaacct gccatcacga gatttcgatt ccaccgccgc cttctatgaa aggttgggct
     6661 tcggaatcgt tttccgggac gccggctgga tgatcctcca gcgcggggat ctcatgctgg
     6721 agttcttcgc ccaccctagg gggaggctaa ctgaaacacg gaaggagaca ataccggaag
     6781 gaacccgcgc tatgacggca ataaaaagac agaataaaac gcacggtgtt gggtcgtttg
     6841 ttcataaacg cggggttcgg tcccagggct ggcactctgt cgatacccca ccgagacccc
     6901 attggggcca atacgcccgc gtttcttcct tttccccacc ccacccccca agttcgggtg
     6961 aaggcccagg gctcgcagcc aacgtcgggg cggcaggccc tgccatagcc tcaggttact
     7021 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga
     7081 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt
     7141 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct
     7201 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc
     7261 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc
     7321 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc
     7381 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg
     7441 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt
     7501 cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg
     7561 agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg
     7621 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt
     7681 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag
     7741 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt
     7801 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta
     7861 ttaccgccat gcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4956/pECMV-3×FLAG-METTL3（1同义突变）人源基因质粒

P1169/pECMV-3×FLAG-H-FABP人源基因质粒

P1170/pECMV-3×FLAG-TRAF6-S12F人源基因质粒

P1171/pECMV-3×FLAG-GSK3B人源基因质粒

P1172/pECMV-3×FLAG-CD1D人源基因质粒

P1719/pECMV-3×FLAG-CD4人源基因质粒

P1830/pECMV-3×FLAG-CD22人源基因质粒

P1195/pECMV-3×FLAG-AFP人源基因质粒

P4834/pCDNA3.1-AFP人源基因质粒

P4100/pECMV-3×FLAG-CCNE2人源基因质粒

P4270/pECMV-3×FLAG-AATF人源基因质粒

P4268/pECMV-3×FLAG-BLVRA(1同义突变）人源基因质粒

P4267/pECMV-3×FLAG-BTN2A2人源基因质粒