细胞消化不下来
丁香园网友freett的问题为:我是新手,第一次培养细胞,按照师姐的配方配了0.05%EDTA-trypsin但发现消化了十五分钟后,细胞还是基本上全贴在瓶壁上,请问各位高手,这可能是什么原因?丁香园网友重剑无锋的观点为:1、最有可能是你的培养液没有去除干净,因为培养液可以中止消化。所以建议用PBS冲洗两次。然后再加EDTA.2、加大EDTA的浓度 ,可以选择0.1%与trypsin混合使 ...
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滤器的使用
1.针头滤器的使用丁香园网友heyj的观点为:用滤膜孔径为0.22um的一次性针头滤器过滤胰酶,一次可以过滤100ml。如果想一次性过滤完可以准备1-2个备用的。注意在配胰酶溶液时尽量完全溶解,否则未溶的颗粒会堵住滤孔影响过滤速度。本人认为过滤效果与滤过的液体量无关。丁香园网友ssl3304的观点为:过滤0.25的胰酶,一次可以滤1L,没有问题的,培养基最多300-400ml,总之一定要充分溶 ...
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收到邮寄细胞后的注意事项
收到细胞株包裹时,请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形,若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养, 或立即冷冻保存(置于-70 ℃, 隔夜后, 移到液氮)。
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小鼠树突状细胞培养攻略
一、方法根据1999年lutz的方法,做了一些改进,培养DC很多人用的是高浓度的细胞,高浓度的因子,但是这样产量不高,我每一次分离一只小鼠的骨髓,大约可以得到107个细胞,分成10盘,每盘10 ml培养基,用低浓度的细胞因子,这样可以大大提高产量,每次能培养得到1*107个DC左右,流式细胞术检测:细胞纯度应该大于90%,这个方法还是很好用的。二、具体步骤1. C57Bl/6小鼠2. 处死小鼠,75%酒精浸泡10 min。3. 解剖取出小鼠股 ...
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