标签: 平板细胞 克隆
当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。平板细胞克隆适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞可用于(1)细胞增殖实验(2)细胞群体依赖性检测
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1、取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。
2、将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37℃ 5%CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2——3周。
3、经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液,加适量GIMSA应用染色液染10——30分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。
4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数克隆,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。
2. 细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度,否则结果的准确度会受到很大影响。
2. 一般初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形成率弱,转化细胞系强;正常细胞克隆形成率弱,肿瘤细胞强。
平板克隆检测放化疗敏感性
做细胞平板克隆试验检测细胞放化疗敏感性时,是先铺板再放化疗还是先放化疗再铺板?怎样选择活细胞,处理过程中不可避免要死细胞啊……
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