细胞培养中霉菌污染问题
Julius:我的细胞被污染了,表现为培养液内有浑浊,可见很多白色粉末的东西悬浮,之前发现一瓶有,就丢了,剩下的及时换液,清洗,可在传代后的第二天就又见浑浊,仍有部分细胞是贴壁的,可以看到很多”细胞“首尾相连成一条条的线状,可细胞怎会是线状生长呢?(抱歉没有拍下照片)请问是霉菌还是细菌污染呢?如何区分细菌,霉菌及真菌的污染。现在如何处理呢?污染控制区大家所说的用甲醛熏蒸,碘 ...
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细胞冻存和复苏标准操作规程(SOP)
背景知识 :细胞培养的传代及日常维持过程中,在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费,而且细胞一旦离开活体开始原代培养,它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;细胞储存在液氮中,温度达-196℃,理论上储存时间是无限的。原理 :细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻 ...
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细胞冷冻保存方法、注意事项
1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态,约为80 – 90 %致密度。 2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质,例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。 3、注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级,无菌且无色(以0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品,如Sigma D-2650 ...
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细胞复苏失败的原因分析
问:以前拿回细胞后,传代、冻存后复苏过几次都没什么问题,最近因实验室孵箱污染,清洁消毒细胞室后,重新复苏,结果连续复苏6支,细胞均未贴壁,今晚复苏6小时后观察有一瓶相对贴壁细胞数较之前复苏失败瓶多,但贴壁细胞状态不好,形态不佳,透光度亦不好!急求各位大侠会诊指导!答:juventus2004认为复苏过程没有问题的,是否是从液氮拿出直接放入温水?培养箱问题,二氧化碳浓度?培养基问题?PH值?要么加 ...
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