动物分组与饮食干预
建立成年标准饮食和高脂饮食模型,并评估营养配方补充的影响。
雄性C57BL/6J小鼠分为YC、OC、OCN、OH、OHN五组,分别给予标准饮食或高脂饮食,OCN和OHN组经口灌胃特制复合营养素配方。
A Specialized Multinutrient Formula Attenuates High-Fat-Diet-Associated Muscle Dysfunction and Sarcopenic Obesity-Related Features in Adult Mice
包含体内小鼠模型与肌肉组织学、功能、分子标志物检测,并含功能与机制验证。
雄性C57BL/6J小鼠 15周龄成年小鼠标准饮食或高脂饮食模型 C57BL/6J年轻小鼠(4周龄)作为年轻对照
雄性C57BL/6J小鼠,分为YC、OC、OCN、OH、OHN五组,每组n=5 特制复合营养素配方经口灌胃,固定剂量280 mg/只,每周5次,持续12周 标准饮食为LabDiet 5001,高脂饮食为TestDiet 58Y1 所有小鼠进行相同非负重爬梯活动,每周3次,每次30分钟 握力在第2、4、6、8、10、12周测量,网格悬挂试验在第12周进行
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立成年标准饮食和高脂饮食模型,并评估营养配方补充的影响。
雄性C57BL/6J小鼠分为YC、OC、OCN、OH、OHN五组,分别给予标准饮食或高脂饮食,OCN和OHN组经口灌胃特制复合营养素配方。
评估饮食和营养补充对体重、腰围、脂肪和肌肉组织重量的影响。
每周测量体重和腰围,实验结束后称量后肢肌肉和脂肪组织重量,并计算相对组织重量。
评估肌肉纤维形态和肌内脂质积聚。
腓肠肌组织进行H&E染色和Oil Red O染色,定量分析肌纤维横截面积,定性评估脂质沉积。
评估饮食和营养补充对肌肉力量和耐力的影响。
使用电子握力计测量前肢握力,并在第12周进行网格悬挂试验评估四肢肌肉耐力。
评估肌肉炎症状态。
提取腓肠肌总RNA,通过qRT-PCR检测Tnf-α和Il-6 mRNA表达,以Gapdh归一化。
评估营养补充对选定分子标志物的影响。
通过Western blot检测cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、Bcl-2、Bax、p-Akt、FoxO3a、p-FoxO3a、p38 MAPK、MuRF-1、III型胶原、TGF-β和GAPDH。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 握力测试 | 电子握力计REZ-5 | Hong-Ming Technology Co., Ltd. | REZ-5 |
| Western blot | 抗cleaved caspase-3抗体 | Cell Signaling Technology | 9664 |
| 抗cleaved caspase-8抗体 | Cell Signaling Technology | 8592 | |
| 抗cleaved caspase-9抗体 | Cell Signaling Technology | 9509 | |
| 抗Bcl-2抗体 | BioLegend | 633501 | |
| 抗Bax抗体 | Abcam | ab32503 | |
| 抗磷酸化Akt (Ser473)抗体 | Cell Signaling Technology | 4058 | |
| 抗FoxO3a抗体 | Bioss | bs-1548R | |
| 抗磷酸化FoxO3a (Ser253)抗体 | Bioss | bs-3140R | |
| 抗p38 MAPK抗体 | Proteintech | 14064-1-AP | |
| 抗MuRF-1/MuRF-2/MuRF-3抗体 | Abcam | ab172479 | |
| 抗III型胶原抗体 | Proteintech | 22734-1-AP | |
| 抗TGF-β抗体 | Cell Signaling Technology | 3711 | |
| 抗GAPDH抗体 | GeneTex | GTX100118 | |
| HRP标记山羊抗兔IgG | Cell Signaling Technology | 7074 | |
| HRP标记马抗小鼠IgG | Cell Signaling Technology | 7076 | |
| LAS-4000成像系统 | FUJIFILM | -- | |
| RT-qPCR | TRIzol试剂 | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | -- |
| HiSenScript RH(-) RT PreMix试剂盒 | iNtRON Biotechnology | -- | |
| 数据分析 | GraphPad Prism 10.1 | GraphPad Software | -- |
| 图像分析 | ImageJ 1.54 | National Institutes of Health | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物分组与饮食干预 | 小鼠品系、性别、周龄;五组分组;标准饮食和高脂饮食品牌;营养配方剂量、给药频率和持续时间。 阅读提示:Methods 2.1 Animal Experiment;Figure 1a。 |
| 肌肉组织学与脂质沉积评估 | H&E和Oil Red O染色步骤;切片厚度;CSA分析每组小鼠数、每只图像数和每张图像分析的肌纤维数。 阅读提示:Methods 2.2 和 2.3;Figure 2 legend。 |
| 肌肉功能评估 | 握力测试时间点、每只测试次数;网格悬挂试验时间、尺寸和重复次数。 阅读提示:Methods 2.4 和 2.5;Figure 3 legend。 |
| 炎症基因表达分析 | RNA提取试剂;逆转录试剂盒;qPCR循环条件;引物序列;技术重复和生物学单位。 阅读提示:Methods 2.7 Quantitative Real-Time PCR;Figure 3c legend。 |
| Western blot分析 | 抗体品牌、货号、稀释比例;凝胶浓度;转膜;成像系统;定量方法。 阅读提示:Methods 2.6 Western Blotting;Figure 4 legend。 |