CIA小鼠模型建立与分组
建立类风湿关节炎动物模型并评估HGWD的治疗效果
使用牛II型胶原蛋白和完全/不完全弗氏佐剂免疫DBA/1J小鼠,建立CIA模型。将小鼠分为对照组、模型组、MTX阳性对照组和HGWD治疗组。
Huangqi Guizhi Wuwu Decoction suppresses inflammation and bone destruction in collagen-induced arthritis mice.
包含CIA小鼠体内模型、RAW264.7细胞体外模型,涉及功能验证(炎症、骨破坏)和机制验证(NF-кB/IL-17)。
胶原诱导性关节炎DBA/1J小鼠模型 LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞
CIA模型建立:使用牛II型胶原蛋白乳化和两次免疫 HGWD给药:0.8 mg/kg,每天一次,持续四周 MTX阳性对照:0.075 mg/mL,每周两次 RAW264.7细胞HGWD处理浓度:0-2 mg/mL 炎症因子检测:血清ELISA和细胞内RT-PCR/Western blot
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立类风湿关节炎动物模型并评估HGWD的治疗效果
使用牛II型胶原蛋白和完全/不完全弗氏佐剂免疫DBA/1J小鼠,建立CIA模型。将小鼠分为对照组、模型组、MTX阳性对照组和HGWD治疗组。
评估HGWD对CIA小鼠关节炎症状的改善作用
测量体重、后爪厚度和临床评分,进行步态分析。
评估HGWD对CIA小鼠关节炎症和骨破坏的影响
使用超声成像评估关节间隙,ABOG染色和TNF-α免疫组化评估炎症,micro-CT评估骨侵蚀,TRAP染色评估破骨细胞。
探究HGWD抗炎的潜在机制
使用LPS诱导的RAW264.7细胞,检测HGWD对炎症因子表达的影响。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| CIA模型建立 | 牛II型胶原蛋白 | Chondrex Inc | #20021 |
| 完全弗氏佐剂 | Chondrex Inc | #7001 | |
| 不完全弗氏佐剂 | Chondrex Inc | #7002 | |
| 药物处理 | 甲氨蝶呤 | 上海东方医药科技有限公司 | #100138 |
| 细胞培养 | DMEM培养基 | HyClone | SH30022.01 |
| 胎牛血清 | Gibco | 10270-106 | |
| 青霉素/链霉素 | Biological Industries | 03-031-1B | |
| 细胞活力检测 | 细胞计数试剂盒-8 | Dojindo | NQ643 |
| RNA提取 | EZ-press RNA纯化试剂盒 | EZBioscience | B0004D |
| 反转录 | 带gDNA去除剂的彩色反转录试剂盒 | EZBioscience | A0010GQ |
| RT-qPCR | 2× SYBR Green qPCR预混液 (ROX2 plus) | EZBioscience | A0001-R2 |
| Western blot | 抗p-NF-кB抗体 | Cell Signaling Technology | 3033 |
| 抗NF-кB抗体 | Cell Signaling Technology | 8242 | |
| 抗IL-17抗体 | Abcam | ab79056 | |
| 抗β-actin抗体 | Sigma | A2228 | |
| ECL底物 | Millipore | WBKLS0500 | |
| ELISA | TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-M0049c |
| IL-1β ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-M0037c | |
| IL-6 ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-M0044c | |
| 步态分析 | 步态扫描系统 | Clever Sys Inc | -- |
| 超声成像 | Vevo 2100成像系统 | FUJIFILM Visual Sonics Inc | -- |
| micro-CT | Scanco vivCT80 | Scanco Medical AG | -- |
| 酶标仪 | 酶标仪 | BioTek Synergy 3 | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| CIA模型建立 | 牛II型胶原蛋白浓度、乳化方法、首次和加强免疫时间、小鼠品系和性别 阅读提示:Methods 2.3节 |
| 药物处理 | HGWD剂量、给药频率和途径;MTX剂量和给药频率 阅读提示:Methods 2.4节 |
| 关节炎评估 | 临床评分标准、每只小鼠重复数、步态分析参数 阅读提示:Methods 2.5节和2.6节 |
| 炎症和骨破坏检测 | ELISA检测的炎症因子、micro-CT扫描参数、TRAP染色方法 阅读提示:Methods 2.9节和2.10节 |
| 体外细胞实验 | HGWD处理浓度、LPS刺激浓度、RT-PCR和Western blot检测的靶分子 阅读提示:Methods 2.13节和2.14节 |