- ￥1000
- EZBioscience
- A0001-R2
- 美国
- 2026年09月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
500
- 英文名：
2×SYBR Green qPCR Mix（ROX2 plus）
- 保质期：
24个月
- 供应商：
EZBioscience
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
5 ml
2×SYBR Green qPCR Mix（ROX2 plus）试剂盒采用具有超强扩增能力和抗干扰能力的化学法修饰的热启动DNA聚合酶，结合其高度优化的缓冲液体系和染料系统，使之具备更强的扩增效率、抗干扰能力，更高的灵敏度和特异性。在相同的情况下具有起峰更早、得到的荧光信号更强、Ct值更小及熔解曲线特异性更高等特点。此外，本试剂盒的2× SYBR Green qPCR Master Mix (ROX2)预混了ROX2染料（low ROX），从而只需要将模板cDNA、引物以及ddH2O添加进去，即可进行qPCR反应。
产品组分
|
组分 |
A0001-R2 (500 Rxns, 20 μl/Rxn) |
A0001-R2-L (2500 Rxns, 20 μl/Rxn) |
|
2× SYBR Green qPCR Master Mix (ROX2) *1 |
5 ml |
25 ml |
注：1*. 包含热启动DNA聚合酶, dNTPs, Mg2+, Buffer,和SYBR Green I染料，且预混了低浓度ROX用于校正不同孔之间的荧光信号误差。
保存条件
本产品所有组分置于-20°C避光保存，可保存24个月。过期日期详见产品标签的有效期信息。
适用的仪器型号
|
ABI 7500, 7500 Fast, Quant-Studio 1, 3, 5, 6, 7, 12K Flex, Dx, ViiA™7; Aligent AriaMx, Stratagene MX4000™, MX3000P™, MX3005P™. |
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Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™; Roche LightCycler™ 96, Roche LightCycler™ 480; Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000; Thermo Scientific PikoReal Cycler; Analytikjena qTOWER 3G; Cepheid SmartCycler®; Bioer Linegene 9600; HONGSHI SLAN®-96P. |
注意事项
使用前，将2× SYBR Green qPCR Master Mix试剂从-20°C冰箱中取出，室温放置5 ~ 10分钟或用手紧握试剂管使之充分融化，上下颠倒10次充分混匀（非常重要），然后使用离心机短暂离心至管底，放在冰上备用。
关于qPCR反应是否良好的判断
1、如果扩增曲线呈典型的S型曲线，荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段及平台期均完整可见，熔解曲线单峰，内参Ct值在合理范围内（通常可在13 ~ 22之间，典型的内参Ct值在15 ~ 20之间），则可认为该反应正常；
2、如果同一个模板和引物的重复孔数据Ct值相差0.5以内；
同时满足以上两个条件的可以认为数据可用。
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文献和实验PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
