DNMT1驱动的RORA甲基化通过SLC2A3促进缺氧条件下食管鳞状细胞癌的进展

背景：RAR相关孤儿受体α（RORA）是一种生物钟分子，与抑癌基因高度相关。在本文中，我们明确了RORA在缺氧条件下食管鳞状细胞癌（ESCC）发展中的精确作用和机制基础。方法：通过RT-qPCR、蛋白质印迹、免疫荧光（IF）和免疫组织化学（IHC）测定进行表达分析。通过检测RORA对细胞活力、运动性、侵袭和肿瘤生长的影响来评估其功能。采用DNA pull-down实验和蛋白质组学分析鉴定与RORA启动子结合的蛋白质。通过DNA焦磷酸测序检测RORA启动子的甲基化水平。进行RNA-seq分析以探索RORA的下游机制，并通过ChIP-qPCR和双荧光素酶报告基因实验验证RORA对SLC2A3的转录调控。通过检测葡萄糖消耗以及乳酸和ATP的产生来评估糖酵解。结果：在体外，RORA被证明在缺氧条件下抑制ESCC细胞的活力、运动性和侵袭。在体内，小鼠异种移植瘤中RORA表达增加阻碍了肿瘤生长。DNMT1被鉴定广泛存在于RORA启动子中，在缺氧诱导的KYSE150 ESCC细胞中增加DNA甲基化并降低RORA表达。机制上，RORA通过与SLC2A3启动子F1区域相互作用来失活葡萄糖转运蛋白SLC2A3的转录。此外，拯救实验揭示RORA介导的ESCC细胞迁移和侵袭的抑制作用主要基于其对SLC2A3和糖酵解的负调控。结论：DNMT1驱动的RORA甲基化主要通过影响SLC2A3转录和糖酵解促进ESCC进展。这些发现使RORA成为抗癌治疗药物的潜在靶点。