去岩藻糖基化策略对抗体功能的影响：糖工程化抗CD20抗体Obinutuzumab和Obinutuzumab beta的比较研究

通过Asn-297的N-聚糖去岩藻糖基化增强抗体依赖性细胞毒性（ADCC）是提高治疗性抗体临床疗效的已验证策略。然而，不同的糖工程方法对抗体功能的影响尚未得到系统阐明。在此，我们实验比较了两种II型抗CD20抗体Obinutuzumab（Gazyva®）和Obinutuzumab beta（MIL62，Bejescin®），它们具有相同的氨基酸序列，但糖基化谱不同。MIL62通过敲除用于生产抗体的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的GDP-岩藻糖转运蛋白（GFT），实现了完全核心去岩藻糖基化（岩藻糖<0.1%），且不含有平分型N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）。相反，Gazyva在过表达β-1,4-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶III（GnT-III）和α-甘露糖苷酶II（α-ManII）的CHO细胞中产生，导致约50%的岩藻糖含量和>80%的平分型GlcNAc占据。这些不同的糖工程策略导致了不同的功能结果：去岩藻糖基化的MIL62显示出改善的FcγRIIIA结合和ADCC效力，而具有平分型GlcNAc修饰的Gazyva表现出更高的糖型异质性和降低的热稳定性。两种抗体均显示出相当的FcRn结合、甘露糖基化、唾液酸化和鼠类药效学，介导血液、淋巴结和脾脏中B细胞的完全耗竭。在抗原再次攻击时，MIL62抑制了特异性抗体滴度，表明记忆B细胞被根除，并具有预防自身免疫复发的巨大潜力。这项研究表明，不同的糖工程策略从根本上重塑了抗体的聚糖谱，而不仅仅是减少岩藻糖。这些结构差异不仅微调了ADCC效力，而且影响了抗体的稳定性。特别是，MIL62的完全去岩藻糖基化导致了优化的ADCC效力，并有效抑制了delta样配体3（DLL3）再攻击模型中的致病性B细胞再增殖，为设计具有优越治疗效果的下一代抗体提供了关键框架。