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用于监测和清除衰老细胞的p21-ATD小鼠模型及其在肝损伤后再生中的应用
A p21-ATD mouse model for monitoring and eliminating senescent cells and its application in liver regeneration post injury
摘要
细胞衰老与病理性衰老和组织功能障碍相关。利用小鼠模型进行细胞谱系追踪的研究强调了不同器官和细胞类型中衰老异质性的重要性。在此，我们构建了一个p21-(Akaluc - tdTomato - 白喉毒素受体[DTR]) (ATD) 小鼠模型，以特异性研究衰老和肝损伤动物中表达p21的衰老细胞的未明确机制。这些基因的成功表达使得能够在体外进行流式细胞分选、在体内追踪以及清除表达p21的衰老细胞。在自然衰老过程中，在p21-ATD小鼠的各种组织中发现了表达p21的细胞。清除老年p21-ATD小鼠中的p21表达细胞恢复了它们的多种生物学功能。由p21-ATD小鼠和肝损伤的延胡索酰乙酰乙酸水解酶(Fah)-/-小鼠杂交获得的p21-ATD/Fah-/-小鼠显示，它们的大部分衰老肝细胞是p21+表型，而非p16+。此外，清除表达p21的肝细胞显著促进了移植肝细胞的定植并促进了肝脏再生，导致肝损伤显著恢复。我们的p21-ATD小鼠模型是研究衰老过程中生理和病理条件下表达p21的衰老细胞的模式和功能的最佳模型。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| 比色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒 | Beyotime | C1908 |
| 用于蛋白质印迹和免疫沉淀的细胞裂解液 | Beyotime | P0013 |
| SDS-PAGE样品上样缓冲液 | Beyotime | P0015 |
| Annexin V-FITC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒 | Sino Biological | APK10448-F |
| 白喉毒素 | Sigma-Aldrich | D0564 |
| AkaLumine-HCl | Sigma-Aldrich | P808350 |
| 胶原酶 | Sigma-Aldrich | V900893 |
| DAPI | Abcam | ab285390 |
| 含DAPI的水性封片剂 | Abcam | ab104139 |
| 红细胞裂解液 | Sangon Biotech | B541001 |
| 中性树胶封片剂 | Sangon Biotech | E675007 |
| SA-β-Gal染色试剂盒 | Solarbio | G1580 |
| 动物组织低温解离试剂盒 | Oebiotec | SC-004 |
| DAB底物试剂盒 | MXB | DAB-0031 |
| SuperScript II逆转录酶 | Takara | 2690A |
| 山羊血清 | Jackson ImmunoResearch | 005-000-001 |
| 乙醇 | Sinoreagent | 270741 |
| 最佳切割温度化合物 | Sakura | 4583 |
| RNAprep纯化组织试剂盒 | Tiangen | DP431 |
| 增强型化学发光底物 | Thermo Scientific | 34580 |
| In-Fusion HD克隆试剂盒 | -- | -- |
| IV型胶原酶 | Gibco | -- |
| 高糖DMEM培养基 | Gibco | -- |
| VISTECH血清 | -- | -- |
| 青霉素-链霉素 | Gibco | -- |
| TRIzol试剂 | Invitrogen | -- |
| 流式细胞仪 | Beckman Coulter | CytoFLEX LX |
| 40微米细胞筛网 | -- | -- |
| 活体成像系统 | -- | -- |
| IVIS光谱活体成像系统 | PerkinElmer Health Sciences | 128201 |
| Leica DM500显微镜 | Leica | DM500 |
| PVDF膜 | Millipore | IPVH00010 |
| 半干转印仪 | -- | -- |
| MoFlo Astrios细胞分选仪 | Beckman Coulter | B52102 |
| 小鼠肝脏解离试剂盒 | -- | -- |
| 70微米尼龙网细胞筛网 | -- | -- |
| Percoll溶液 | -- | -- |
| 1×红细胞裂解液 | -- | -- |
| Fc阻断剂 | -- | -- |
| Cytoflex流式细胞仪 | BECHMAN | -- |
| TUNEL检测试剂盒 | Beyotime | C-1098 |
| 二甲苯 | -- | -- |
| 蛋白酶K | -- | -- |
| 链霉亲和素HRP溶液 | -- | -- |