Annexin V-FITC/7-AAD 凋亡检测试剂盒

产品信息：
应用：流式
储存及稳定性：2℃-8℃避光保存，勿冷冻。
本试剂盒所有组份依保存条件储存，自收到之日起一年有效。
安全注意事项：7-AAD是一种潜在的致癌物。为了您的安全和健康，操作时请穿实验服、戴手套、做好眼睛及面部防
护，避免7-AAD接触皮肤及眼睛。
试剂盒组分：

应用验证：
Annexin V-FITC/7-AAD 凋亡检测试剂盒在喜树碱处理过的Jurkat细胞上做常规验证。Annexin V与磷脂酰丝氨酸（PS）的结合为钙离
子依赖性的，在反应时需使用含钙离子的缓冲液。
Annexin V-FITC/7-AAD 凋亡检测试剂盒未在贴壁细胞上做常规验证。在贴壁细胞的收集过程中，消化细胞容易造成细胞膜损伤，从
而导致产生错误的实验结果。在您的研究中如果用到贴壁细胞，建议提前摸索细胞消化条件，并且尽量避免使用含EDTA的细胞消化
液，以免产生错误的实验结果。

流式细胞术检测Annexin V-FITC染色。Annexin V-FITC及7-AAD在未处理的Jurkat细胞（上图）、4μM喜树碱（Sigma，货号C9911）处
理5小时（中图）及18小时（下图）的Jurkat细胞上的染色结果。未处理的细胞主要为Annexin V-FITC及7-AAD阴性。喜树碱处理5小时后，
主要出现两群细胞：未凋亡的活细胞（ Annexin V-FITC 、7-AAD双阴性），早期凋亡的细胞（ Annexin V-FITC 阳性、7-AAD阴性）。
一小部分Annexin V-FITC、7-AAD双阳性的细胞为凋亡晚期及已经死亡的细胞。经过18小时的处理后，凋亡晚期及已经死亡的细胞
（ Annexin V-FITC、7-AAD双阳性）比例明显增加。

染色步骤
微量液体建议开盖前瞬时离心
1. 收集细胞，用4℃预冷的PBS洗细胞2次，离心去上清后用1×Binding Buffer重悬细胞至细胞密度为0.1×107~1×107 个/mL。
1×Binding Buffer : 1份10×Binding Buffer中加入9份蒸馏水，混匀，现用现配。
2. 将细胞悬液转移至流式管中，每管100 μL.
3. 每管细胞中加入5 μL Annexin V-FITC及5 μL 7-AAD，轻轻混匀，室温（25℃）避光孵育15min。
4. 加入400 μL 1X Binding Buffer终止反应，1小时内上机检测。
注意事项
1. 为了得到准确的实验结果，建议设置以下对照：
a) 阴性对照：未染色的细胞。
b) 单染对照：只染Annexin V-FITC（无7-AAD）的细胞，只染7-AAD（无Annexin V-FITC）的细胞。
阴性对照和单染对照用于设置流式细胞仪电压及补偿。
c) 实验对照：未处理的细胞，用于确定本底水平的凋亡及死亡的细胞比例。
d) 选做对照：为确定Annexin V-FITC的结合特异性，在加入Annexin V-FITC之前，可用纯化的Annexin V（10448-HNAE）封闭
Annexin V-FITC的结合位点。
2. 不要使用保质期外的试剂。
3. 避免混合使用不同批次的试剂。