流式细胞术在血小板分析中的应用

本文主要介绍与血液系统疾病相关的 FCM 检测项目，体现在以下几方面：

1. 血小板糖膜蛋白按分布部位分为质膜和颗粒膜糖蛋白，质膜糖蛋白主要存在于静止血小板细胞膜表面，而颗粒膜糖蛋白则主要存在于血小板胞质内的α颗粒、δ颗粒和溶酶体颗粒。

1.1 血小板膜糖蛋白表达的分析，如 GPІb/IX/V 复合物（CD42b/CD42a/CD42d），GPⅡb/GPⅢa 复合物（CD41/CD61）、GPІa/Ⅱa（CD49b/CD29）、GPІc/Ⅱa（CD49e/CD49f/CD29）等定性与定量的分析。

1.2 颗粒膜糖蛋白表达的分析，如α颗粒膜蛋白（alpha-granule membrane protein，GMP）（CD62P）；溶酶体膜上有三种糖蛋白，包括溶酶体完整膜糖蛋白（LIMP）、溶酶体相关膜蛋白-1（LAMP-1）、溶酶体相关膜蛋白-2（LAMP-2）. 按照 HLDA 的分类原则，分别命名为 CD63、CD107a、CD107b。

2. 网织血小板（reticulated platelet，RP）计数，RP 是从骨髓中新近释放入外周血中的血小板，它反应了循环中最年轻的血小板。因而 RP 是分析血小板生成状态的有用指标。其计数对于分析骨髓巨核细胞血小板生成动力学和血小板减少机制具有重要意义。与成熟血小板相比，RP 中残留有 mRNA，TO（噻唑橙）可以透过血小板细胞膜特异性节结合 RNA，用 FCM 对带有核酸特异性荧光标记的 RP 进行检测。

3. 血小板自身抗体测定包括特异性血小板抗体、血小板相关免疫球蛋白（platelet associated immunoglobulin，PAIg）、血小板同种抗体、药物相关血小板抗体等。

在一些自身免疫病、服用某些药物、同种免疫反应、输血等情况下，机体可产生抗血小板自身抗体，这些自身抗体可导致血小板破坏增加或者生成障碍、使循环血小板显著减少、引起患者发生出血性疾病。血小板自身抗体分为血小板相关免疫球蛋白（PAIg），包括 PAIgG、PAIgA、PAIgM 和特异性糖蛋白自身抗体、药物相关自身抗体、抗同种血小板抗体。这些抗体可采用 ELISA、FCM、免疫荧光显微术等方法进行测定。

4. 免疫血小板计数，以 CD41 或 CD61 设定血小板门，计数单位体积血液中血小板的绝对数量，尤其是血小板减少症患者中血小板的计数。

4.1 红细胞与血小板比值法 运行 CELLQuest 软件，将 FSC、SSC、FL2 设置为对数放大，按照 FSC/SSC 和 FSC/FL2 方式设定血小板（PLT：左上象限,UL）和红细胞门（RBC：右下象限，LR），共收集 50000 以上细胞，1000 个以上血小板，按公式计算酶微升血中血小板的数量（PL/ul），在临床方面，主要是在恶性肿瘤放化疗、免疫治疗、骨髓移植后骨髓造血功能的检测以及骨髓造血功能障碍引起的血小板极度较少下的精确计数。

编辑： weicf    来源：丁香园