外泌体鉴定

1. NTA（纳米颗粒跟踪分析）
原理：通过激光散射追踪溶液中外泌体布朗运动，动态分析粒径分布与浓度。
优势：
✅ 直接测量流体环境中的颗粒（30-1000 nm）
✅ 无需标记，保留样本天然状态
✅ 提供粒径分布热图与颗粒浓度（颗粒/mL）
2. TEM（透射电子显微镜）
原理：高能电子束穿透样本，超薄切片或负染后观察外泌体超微结构。
优势：
✅ 金标准形态学验证：清晰呈现典型"杯托状"双膜结构（直径≈30-150 nm）
✅ 分辨率达0.1 nm，可识别囊泡完整性
3. 纳米流式检测（NanoFCM）
原理：高频散射光与荧光信号结合，单颗粒水平分析外泌体物理与表型特征。
优势：
✅ 多参数检测：粒径（40-1000 nm）+ 表面标志物（CD9/CD63/CD81等）
✅ 高通量（>10,000颗粒/秒）
✅ 接近流式细胞术操作体验
4. WB（蛋白质免疫印迹）
原理：SDS-PAGE分离外泌体裂解液蛋白，抗体特异性检测标志物。
优势：
✅ 特异性验证：确认TSG101、Alix等外泌体特征蛋白
✅ 半定量分析目标蛋白表达量
关键点：
⚠️ 需排除细胞碎片污染（需Calnexin阴性对照）
⚠️ 样本量要求高（通常需≥10^9颗粒）
技术联用价值
▶️ 完整性表征：NTA（粒径/浓度）+ TEM（形态）
▶️ 表型精准分析：纳米流式（单颗粒多标志物）+ WB（特征蛋白验证）
▶️ 质量控制黄金组合：四联检测覆盖物理属性、形态、表型及分子标志物，确保外泌体研究可靠性。
总结：多维度交叉验证是外泌体研究的核心策略，突破单一技术局限，为功能机制与临床应用提供坚实数据基础