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- 外泌体指标鉴定实验
- 上海
- 2025年12月26日
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伊莱博生物科技（上海）有限公司
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分子实验技术服务
外泌体指标鉴定实验：外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 （30-150nm），现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。
一、实验原理
所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。
外泌体（Exosome）主要检测指标为CD63、CD9、CD81、Tsg101、Alix、HSP70等，针对外泌体的定性检测，至少选择2-3个指标就能满足文章发表就可以。大部分文献中没有检测内参，个别文章中使用了Actin、GAPDH和Tubulin作为内参进行检测，外泌体中的Actin、GAPDH和Tubulin的表达丰度相对于正常细胞样品中的较低，可能会检测不到任何条带或者条带微弱。
二、实验流程
1. 外泌体BCA法定量。
2. 变性聚*不连续凝胶电泳（SDS-PAGE）。
3. 蛋白质转移到PVDF膜。
4. 膜的封闭和抗体孵育。
5. 结果检测。
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文献和实验注：如同时要求外泌体抽提、鉴定及蛋白质组学，请将样本要求量进行加和。 备注：请明确提供的样本体积。细胞上清及尿液，超过 50ml，每 50mL 算作一个 1 个样本，以此计算样本数，核算抽提周期。血清、血浆、关节液、脑脊液进行超速离心，每 5mL 算作 1 个样本，以此计算样本数，核算抽提周期。
TEM 透射电镜是外泌体鉴定的金标准，对于所有做外泌体的朋友们来说，是必经之路，基于很多老师们的呼声，我们的研究人员，经过细致化整理，把所有的操作过程都整理出来，供各位参考，经验有限，有不当之处，还请多多沟通。 一、首先，我们看看电镜的原理是啥？ 然后，电镜的结构也是比较复杂的！ 二、那么，我们看看样品有哪些要求？样品要求：1、能被电子束穿透（薄）2、耐电子束轰击3、有磁性的样品不可以放置4、长纤维样品若需上样需加盖铜网 三、接下来，我们看看规范化拍摄 Umibio 是怎么操作
实验目的： 通过 DIR 染料标记外泌体，通过尾静脉注射 DIR-labeled Exosome，24 小时内观察外泌体在体内的代谢情况。 实验材料： DIR- Exosome，裸鼠； DIR-Exosome：染料终浓度 1uM，外泌体 200ug，体积 200ul； Exosome 来自 HEK293 无血清培养基（Umibio，UR51102）条件下获得，通过外泌体提取试剂盒提取（Umibio，UR52121）。 实验内容： 1、通过尾静脉注射 200 ug/支的 DIR- Exosome
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