蛋白质凝胶电泳凝胶的制备方法您知道嘛?

　　  蛋白质凝胶电泳凝胶的制备方法您知道嘛?

　　  【材料与试剂】

　　  (1)30%的丙烯酰胺：分别称取29g丙烯酰胺，1g N,N-亚甲双丙烯酰胺加温热的去离子水60ml，加热至37℃溶解，补加水至终体积为100ml,过滤，即配成30%(w/v)丙烯酰胺贮存溶液。丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸，这一脱氨基反应是光催化或碱催化，故溶液的pH值不超过7.0，应置于棕色瓶中4℃保存。

　　  (2)10%十二烷基硫-酸钠(SDS)：称取10gSDS加去离子水90ml加热至68℃，加几滴浓盐酸调节至pH7.2加水至100ml，即为10%(w/v)SDS。

　　  (3)浓缩胶缓冲液(1mol/L Tris-HCl pH 6.8)：12.12g Tris溶解在80ml去离子水中，用浓盐酸调节pH至6.8,再加去离子水至100ml。4℃保存。

　　  (4)分离胶缓冲液(1.5mol/L Tris-HCl pH 8.8)：18.16g Tris溶解在80ml去离子水中，用浓盐酸调节pH至8.8,再加去离子水至100ml。4℃保存。

　　  (5)10%过硫-酸胺(AP)：过硫-酸胺提供催化丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基，可用去离子水配制小量10%(W/V)贮存液并4℃保存。由于过硫-酸胺会缓慢分解，故应隔周新鲜配制。

　　  (6)TEMED(N，N，N,N-四甲基乙er胺)TEMED通过催化过硫-酸胺形成自由基而加速丙烯酰胺和双丙烯酰胺的聚合，由于TEMED只能以游离碱的形式发挥作用，因此pH值较低时聚合反应受到抑制。

　　  (7)Tris-甘氨酸电泳缓冲液：分别称取15.1g Tris和94g甘氨酸，溶解在900 ml去离子水中，然后加入50 ml 10%(w/v)SDS，再加去离子水至1000 ml则成5?贮存液。使用时稀释5倍，终浓度Tris为25mmol/L、甘氨酸为250mmol/L、0.1%SDS，缓冲液pH为(8.3)。

　　  (8)聚丙烯酰胺凝胶电泳槽和电泳仪

　　  (9)加样器和吸头等

　　  古朵小编详述【操作方法】

　　  (1)根据垂直电泳槽说明书安装玻璃板，确定需配制分离胶的浓度和体积，按“配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液”所列成分(见书末附录)配制所需分离胶;

　　  (2)迅速将分离胶注入两玻璃板间隙中，留出灌注积层胶所需空间(梳子的齿长再加1cm，用滴管小心地在分离胶上覆盖一层0.1%SDS(当丙烯酰胺浓度≤8%时)或异ding醇或水(当丙烯酰胺浓度≥10%时)，覆盖层可防止氧扩散进入凝胶而抑制聚合反应。将凝胶垂直置于室温下;

　　  (3)分离胶聚合完全后，倒出覆盖层液体，用去离子水洗涤凝胶顶部数次以除去未聚合的丙烯酰胺，尽可能排除凝胶上的液体;

　　  (4)确定需配制浓缩胶的体积，按“配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液”配制所需浓缩胶，然后直接将浓缩胶灌注在分离胶上，立即插入干净的配套梳子，避免气泡，然后加入浓缩胶溶液以充满梳子之间的空隙。待浓缩胶聚合后，拔出梳子，形成加样孔;

　　  (5)用去离子水将Tris-甘氨酸电泳缓冲液贮存液稀释5倍，倒入电泳槽，将加样孔充满，这时加样孔中的气泡可通过电泳缓冲液排除。

　　  蛋白质凝胶电泳凝胶 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针