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WB（蛋白免疫印迹）
WB（蛋白免疫印迹）
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实验方法
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问
怎样更好的跑出蛋白条带
dxy_gwrp7ndq
1.制胶：先制分离胶，再制浓缩胶，严格按照制胶说明书来就可以了。需要注意的一点是制胶一定要混匀！混匀！混匀！个人经验是每加一种试剂，就混匀一下，直到最后一种试剂加完。 对于初学者，还要区分制胶的玻璃板是 1.0cm 还是 1.5cm 的，两者需要的制胶液体量是不一样的。另外，玻璃板一定要洗干净，本人平时都是用洗洁精洗干净然后用水冲洗最后用纯水冲洗，再放在烤箱里烤干并晾至室温。 2.点样：点样的过程
3 回答
810 围观
问
WB条带灰度如何分析，数据如何处理？
府宅
比较简单的综合性质图像处理软件ImageJ可以很方便的进行灰度分析，而且ImageJ是免费软件，可以在其官网直接下载使用。
3 回答
923 围观
问
超声粉碎细胞时需不需要冰上操作，怎么样才能不让温度升得太高？
whilt-shirt
正常来说是需要的，但是不太好操作，一般都是超声5-10s放冰上，然后再超声
3 回答
1061 围观
问
Wb实验中二抗的作用？
府宅
二抗用于检测细胞或组织样本中的蛋白表达。它与抗原特异性一抗结合，二抗可检测目标蛋白中的高度特异性氨基酸序列。二抗对一抗的指定区域或区域的特异性允许多个二抗与单一一抗结合，放大信号并增加检测敏感性。二抗保存的好可用2-3次。
3 回答
11794 围观
问
曝光后膜全黑，不知道是什么原因？
此用户已注销
问题已经解决了，是一抗和二抗浓度过高了
2 回答
1697 围观
问
低丰度表达的蛋白做WB有什么好方法吗？
丁香实验
低丰度蛋白用WB检测的确会有些困难，但第二张我看到目的条带了，既然丰度低就意味着非特异性结合会提高，我建议你有两点：1，二抗浓度的把握要精准，在能呈现目的条带时降低二抗非特异性结合的概率2增加Tween-20的工作浓度，用更改过的工作浓度去配置TBST清洗，背景的效果可能会改善不少，自然而然目的条带也会展现出来了。
1 回答
796 围观
问
WB 点样孔有残留，跑出的条带就变形了，这是怎么回事呢
丁香实验
我老师说出现这种情况在水浴5-10分钟试试
1 回答
404 围观
问
【原创】Western blot 之制胶技巧，易翻车点及其解决方法汇总
丁香实验
说到WB制胶，相信很多同志都有说不尽的"翻车"故事。俗话说的好，工欲善其事必先利其器，SDS PAGE凝胶就是我们做WB要利的器，因为高质量的胶是跑出漂亮条带的重要前提之一。今天我们就来探讨一下制胶这个事。一、SDS PAGE 凝胶制备1、玻璃板梳子的清洁先用自来水浸泡5分钟，洗洁精清洗，注意厚玻璃板两侧沟槽容易残留胶，可以用尖锐的东西轻刮，然后用自来水冲洗干净泡沫，再用纯水冲洗即可，37度烘干或
1 回答
7956 围观
问
wb 小白求助 E-cadherin 和 N-cadherin 转膜条件和分子量是多少？
丁香实验
E-cadherin是135，一抗的话我们是4℃。转膜的话，我们是恒流，300mA，90min左右
1 回答
1067 围观
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