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流式细胞术
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问
怎样用流式细胞仪来鉴定小鼠BMDC?
西柚味的芋圆
这个BMDC是从小鼠骨髓冲洗出来的细胞,在体外用IL4和GM csf1刺激七天培养行成的细胞吗?单纯看纯度的话,我觉得 CD11c就可以了吧
8 回答
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问
请问流式细胞术单抗直接荧光需要几种对照?
dxy_zutyknhe
先确定你用的直标抗体的荧光染料,然后确定该抗体的来源总属,选择相应的同型对照
12 回答
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问
流式细胞仪检测细胞凋亡结果分析问题
莹啊免疫啊
感觉分群分的不太好,至少得重复三遍才行,试试看第二遍时候会不会好一点。
7 回答
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问
凋亡分析处理细胞时大部分细胞都处于pi坐标的负轴是什么原因?如何处理?
西柚味的芋圆
电压太低了,你做的时候一定要用单染管去调好电压
18 回答
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问
流式细胞仪如何实时监测胞内钙内流?
西柚味的芋圆
把横坐标设置为为时间,纵坐标做为线性荧光强度。先上样跑一小会儿,然后不操作软件,取出样品管加入离子霉素混匀,再收集一小会儿,可观察到往上走的曲线
6 回答
1619 围观
问
流式细胞术测不同浓度LPS刺激12h后RAW264.7 ,ROS 结果分析问题
西柚味的芋圆
你做这个的时候有没有用考虑到自发性荧光的影响。同时巨噬细胞类的检查需要先孵育Fc
9 回答
3736 围观
问
流式细胞周期模型 RMSD 值为什么这么大?
dxy_0mxazdaw
这个与你流式电压调的太大有关系。另一方面,加入的染料或者抗体浓度有可能过高,建议新买的抗体或者染料做一个梯度稀释,寻找到最合适的染色浓度。
6 回答
2628 围观
问
检测细胞中叶绿素的绝对值计算问题
西柚味的芋圆
感觉不太行,为啥不用液相色谱或者别的方法。一定要测的话,可以,用特定浓度的标准品用流式跑标准曲线进行检测
4 回答
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问
如何有效提升特异性荧光染色的方法?
lyang556
用石蜡包埋,然后切片尽量切薄(3μm),可使细胞轮廓清晰。用0.1%硼氢化钠室温处理20分钟,然后0.5%苏丹黑室温处理3分钟,以降低自发荧光。
15 回答
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问
怎样用流式细胞仪来鉴定小鼠BMDC?
丁香实验
检测小鼠BMDC主要是从形态学和细胞表面分子两方面来鉴定我做的时候就做了普通光镜下形态、电镜(扫描和透射),另外检测了小鼠BMDC表面的共刺激分子如CD86、CD11、CD80。还做了MHC II类分子的检测,还有MHCI类分子的检测,这些分子在DC表面都不是特异存在的,在巨噬细胞、淋巴细胞表面也有表达,所以目前并没有非常特异性的方法检测你的细胞一定就是DC,但是从形态和表面分子的检测结合来看,效
1 回答
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问
流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙?
LM0309w
1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(IsotypeControl):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。如果一抗是多抗,可以
9 回答
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问
流式细胞仪检测细胞周期是否需要鸡红细胞作参照?
丁香实验
不用,标准微球做完laser alignment(光路校正)就可以了。尽量把微球的各色CV值控制在1.5以内。
1 回答
399 围观
问
流式与werstern的区别?
丁香实验
(1)Western 是检测蛋白表达的金标准,可用于检测细胞多种类型的蛋白;流式细胞术的方法多用于检测细胞膜蛋白,虽然也可通过Triton-X100给细胞打孔的方法来检测胞内蛋白,但对于分泌蛋白却是无能为力的;(2)Western测蛋白含量对抗体的量需要很少,一般1:1000左右,而流式对抗体的需要量很大,一般1:50(很浪费抗体);(3)采用Western方法检测细胞蛋白含量的变化一般要有内参,
1 回答
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问
流式中检测细胞表面和细胞内蛋白表达水平的抗体有何区别?
丁香实验
抗体只是针对相应抗原的,至于是针对胞内还是胞膜对你检测来说并无明显影响,你只需要查清楚到底是针对哪一个部位的抗原的,应该是可以用同一种抗体进行检测的,在流式操作时只需注意:如果是针对胞内,则需要加破膜剂,让抗体能和相应抗原接触,否则就不需要了。
1 回答
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问
流式同型对照怎样选择?
丁香实验
同型对照:是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类,若使用直接免疫荧光染色法,同型对照也应标记荧光色素,如IgG1 FITC、IgG2a、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外,同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F:P比值(标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值)应该相同为最佳,这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义,切忌使用与
2 回答
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