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实验问答

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问补体介导的细胞毒试验小鼠胸腺细胞图片

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问SiRNA的体外稳定性实验，在核酸酶，肝S9和血浆中的稳定性

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问想请问用RNAlater保存组织后做冰冻切片去显微切割，用smart-seq对切割下来的组织去测序，这种方法有试过嘛

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问具体如何做才能得出两株菌的LPS转运蛋白的差异

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问膜蛋白纯化过程中溶膜相关问题？

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问细胞凋亡检测试剂怎么选择呢？

我是金博士

细胞凋亡检测试剂已经是常规试剂了，选择没那么复杂。国产的多是买的国外的自己进行分装，实验试剂这东西，经费少的话可以试试国产，经费足或者对结果要求高建议还是就直接用国外的好。如果你仅仅是一般地细胞凋亡，可以用Annexin V-FITC&PI，这个凯基公司有的，我用过。好像是20T，5-600RMB。如果你还涉及到了细胞内本身表达报告基因,诸如(E)GFP之类的，你可以买BD公司的Annex

2 回答2679 围观

问大肠杆菌感受态细胞制备时的CaCl2浓度到底是多少呢？

我是金博士

我们用0.1 mol/L，参照分子克隆的来。用CaCl2·2H2O可以，只要浓度一样就行了。

1 回答4407 围观

问细胞传代消化时间过长，消化不下来，这样会对细胞有损害吗？

zyj0630

消化时间过长对细胞的呼吸酶和膜蛋白有损害作用，可以通过拍打细胞培养瓶的物理手段来缩短消化时间。但是个人认为你描述的情况，即本来这种细胞消化时间没那么长，培养时间过长再传代时消化时间变长，这个细胞的有些性质可能已经发生变化了……后续实验中使用不是很好。

1 回答4999 围观

问在各个序列相上呈现什么样的密度可以考虑为脊髓瘤呢？

我是金博士

1、脊索瘤的诊断特征：有不规则肿块，形态欠规整。在T1 加权图像上呈低信号，在T2加权图像上呈不均匀高信号。2、脊索瘤可以与鼻咽癌、脑膜瘤、颅咽管瘤以及软骨瘤鉴别。鼻咽癌起源于咽隐窝，信号强度较均匀，很少有钙化，有显著异常对比增强。颅中窝底脑膜瘤很少引起邻近骨的广泛破坏，T2WI 图像呈等信号甚至低信号，具有十分明显的异常对比增强。颅咽管瘤在T1WI 与T2WI 图像信号强度变化幅度大，增强较少见

1 回答1133 围观

问质粒怎么都提不出来，该用哪种方法？

琴琴小贝

分支杆菌中的质粒提取：采用经典的碱裂解法。取4.5 mlEP管一支，加0.5 ml菌液，加入1 ml溶液1（15％蔗糖、25 mMTriscl pH8.0、10 mMEDTA pH8.0)，隔时加入溶菌酶，终浓度10 mg/ml，小心混匀。置于0度冰浴30 min，加入2 ml溶菌液2（0.2NNao 1%SDS）,0度冰浴10 min，加1.5 ml 3M NaAC小心混匀。1 000 rpm离

1 回答3744 围观

问大肠杆菌转化子有大有小，结果诡异，有何原因？

我是金博士

这情况我遇到过，尤其菌液PCR时候，有的强有的弱，有的带大小还不一样。我没有具体研究过啥愿意，但把大小一样的那个送去测序，一般都是正确的。关于你的这个情况，我分析【我自己的我也分析过】1、可能酶产物碎了一些，这样连进去就有大有小。如果你引物用的是在载体上的，那很可能扩出大小不同的。如果你引物就是在基因上的，这个好解决，你把退火温度逐渐提高，看看是不是那个不同片段就没了。2、有的时候发生了片段自连【

1 回答6574 围观

问克隆时发生突变了怎么办？

zhongmindai

回复突变可以用定点突变（site-directed mutation） PCR，但是周期也不会短。克隆的片段不长的情况下，多挑几个去测序，里面肯定会有对的。尽量选用具有更高保真性的酶扩增。

1 回答2774 围观

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