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实验问答

28,816,432 科研人在看

问免疫组化一般如何设置对照组？

我是金博士

原则上讲，所有实验都应该设置阳性对照（用以检验染色过程成功），阴性对照（用以检验阳性结果为真阳性），空白对照（用以排除非特异背景染色）。不过，由于样本选取的复杂性，国内多数实验室以及国外多数小实验室，都无法做到规范的阴性对照，所以普遍以空白对照代替阴性对照，而这种方法也在国内外得到承认。

2 回答4155 围观

问PCR 时如果不同组加的 cDNA的总量不一样有影响吗？

phhcrab

管家（内参）基因必须做啊，不然发文章没戏

2 回答2751 围观

问异常PCR条带该怎么处理？

我是金博士

不知道你的目的条带是多大？PCR出现问题是很正常的，一般的解决办法是：（1）摸索PCR条件，优化模板浓度，温度梯度等；（2）重新设计引物。

2 回答1458 围观

问关于 EMSA 探针的选取，该使用已商品化的还是分别设计合成？

丁香通采购助手

可以先咨询一下探针供应商，如果不可行的话，那样也可以请公司合成探针，计算下成本，在去顶方案吧，化学发光EMSA试剂，现在商品话的试剂盒也比较成熟了了，点击看看化学发光EMSA试剂盒

1 回答5851 围观

问RT-PCR 没有产物是为什么？

我是金博士

可能原因：1）RNA被降解建议解决方法：在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA；在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰胺中储存RNA；如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0，否则抑制剂或释放所有结合的RNase。而且，在≥0.8 mM DTT时加入RNase抑制剂，一定要存在DTT。2）RNA中包含逆转录抑制剂建议解决方法：通过乙醇

1 回答1274 围观

问RT-PCR出现非预期条带是怎么回事？

我是金博士

可能原因：1. 物和模板非特异性退火，建议解决方法：在第一链合成中使用GSP，而不是随机引物或oligo(dT)。试用允许高温cDNA合成的GSP。2. GSP设计较差，建议解决方法：遵循用于扩增引物设计的同样原则。3. RNA中沾染了基因组DNA，建议解决方法：使用扩增级DNaseⅠ处理RNA。使用没有逆转录的对照反应检测DNA污染。

1 回答1482 围观

问双向电泳跑不好啊怎么办？

phhcrab

这个实验比较复杂，要做得好有难度，特别是大胶。样品制备是关键，后续的操作也很重要。试剂尽量用好一点的，不要省这个钱。多向做过的前辈取经，还有可以咨询设备厂家（GE或Bio-Rad）的技术支持。

1 回答1418 围观

问蛋白如何获取？

我是金博士

重组获得哦，通过基因克隆，表达获得蛋白。

1 回答1140 围观

问如果出现非特异性带，可能有哪些原因？

我是金博士

可能的原因有：1、引物设计不合理，出现发夹结构或二聚体；2、退火温度不合适；3、聚合酶质量不好；4、有污染；5、引物不纯或过量；6、模板过量。

1 回答2039 围观

问PCR 和原位 PCR 在概念上有什么区别？

phhcrab

原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR既能分辩鉴定带有靶序列的细胞，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值。简单的说原位PCR的样品要像类似于组织切片那样先做下

1 回答1622 围观

问人体皮肤黏膜的真菌如何培养检测？

我是金博士

可以富集培养，然后观察形态，用16sRNA做菌种鉴定。

1 回答1386 围观

问免疫组化中边缘效应很明显，请问有什么方法可以消除？

我是金博士

沿着同一方向研磨，磨久一点。还不行的话，试试超声。边缘效应很严重的话，可以在板边缘划线，另外，饱和一下溶剂再跑~~让点好样的板现在展开溶剂中饱和15min左右在展开，点样尽可能在板的中心也可以一定程度上减少边缘效应的影响。

1 回答2662 围观

问求问骨髓间充质干细胞培养方法？

我是金博士

按1-2×1undefined5cm2密度接种于25cm2培养瓶中（内有含10%FCS的L-DMEM培养基），于37℃、5%CO2、95%湿度培养箱中原代培养，24小时后首次换液，弃去造血干细胞等非贴壁细胞，以后每2-3天换液1次。当细胞达到80%-90%融合时，用0.25%胰蛋白酶(0.1ml／cm2)消化1-3min，镜下观察细胞变圆、间隙变宽、少量细胞悬浮时，胎牛血清终止反应，按1传2-3比例（1×1undefined

1 回答2063 围观

问请问做裸鼠皮下胃癌细胞系成瘤，接种哪个部位比较合适？

lostree5544

我们选择的是腋窝，作参考哈

1 回答3264 围观

问求指教 PCR 技术与 DNA 序列分析在生物物种保护中的作用？

丁香通采购小助手

PCR技术应用：研究：基因克隆；DNA测序；分析突变；基因重组与融合；鉴定与调控蛋白质结合DNA序列；转座子插入位点的绘图；检测基因的修饰；合成基因的构建；构建克隆或表达载体；检测某基因的内切酶多态性。诊断：细菌(螺旋体、支原体、衣原体、分支杆菌、立克次氏体、白喉杆菌、致病大肠杆菌、痢疾杆菌、嗜水气单胞菌和艰难梭菌等)；病毒(HTLV、HIV、HBV、 HPVS、EV、CMV、EBV、HSV

1 回答1945 围观

问出现片状拖带或涂抹带该怎么办？

hellokitty5

PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对策有：①减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量，减少循环次数

1 回答2572 围观

问出现非特异性扩增带是何原因？

我是金博士

PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：①必要时重新设计引物。②减低酶量或

1 回答4681 围观

问PCR 有条带，但是转化后再验证却出现假阳性？

我是金博士

出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。　　引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。　　靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染，导致假阳性。二是空气中的小片段核酸污染，这些小片段比靶序列短，但

1 回答2701 围观

问胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立方法？

1279 围观

问PCR 的异常条带是为什么？

我是金博士

你是按文献的引物P的吗？首先PCR设计引物也不是太难，完全可以自己做；其次很多文献上的引物甚至基因不一定是对的，还是要根据NCBI里面的来；最后针对您的情况，可以再优化下条件PCR，还是不行的话，不要纠结，重新设计引物吧，这样快一点。

1 回答2281 围观

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