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        出现非特异性扩增带是何原因?

        相关实验:聚合酶链式反应(PCR)

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        hellokitty5

        PCR出来的条带不是我想要的,我的目的条带是1751 bp,可跑了胶能看到的条带都落在100 bp左右,一看就是杂带了,咋回事啊?有法子不?
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        1 个回答

        user-title

        我是金博士

        有帮助
        PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有:①必要时重新设计引 物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸)。
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