实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问为什么 WB 有荧光，但曝光失败？

yunzhongmanbu555

我觉得很可能是显影液的问题。新鲜的显影液应该是淡黄透明，如果变成酱油色就尽量别用了。以前我就遇到过这种情况，一换显影液，马上就可以显出了。

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问胚胎细胞凋亡检测用哪种试剂盒比较好？

lijuan2008_李娟

Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒，不错，实验室都在用

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问病理科的标本（肿瘤）石蜡切片，可以做western blot吗？

zq2008fish

可以的，用过西安晶彩的石蜡组织蛋白提取试剂盒提蛋白，再按常规WB实验操作，做出来效果还不错。

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问请教有关TSC2蛋白的转膜条件是什么？

天王盖地虎-0

Tuberin 我们也在做，或许可以把你的样本给我试试我手里的抗体

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问针对EV71的VP1的特异记忆性B细胞，对记忆B细胞进行单个细胞RT-PCR，如何设计引物呢？

yuandingli

你如何获得单个B细胞的？如果是血液来源的B细胞，还要筛选吧？如果是融合的细胞，用恒定区的引物就行了。

2 回答1410 围观

问贝类的血细胞能否直接用试剂盒？

苏格兰白草莓

申请个试用装试试就知道了，反正实验材料还是很好获得的吧

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问做转化后菌P时直接挑取单菌落进行PCR，有哪位大侠做成功了？

我是金博士

你是有啥问题吗？转化挑取单菌落PCR，菌落不要太多，其余就按常规PCR流程。一次性多P个几管，分别从不同的平板上挑。

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问IFN-γ 的 PCR 均不能扩出片段是为什么？

wangweishi_1986

如果引物设计的没问题的话，两个建议：1.降落PCR，2.先将引物对99℃10s，再放冰上，再加到PCR体系里，试一试

2 回答1608 围观

问为什么要铺两层浓度不同的琼脂呢？

塞舌尔墨宝

底层浓度高提供营养同时防止细胞贴壁，上层浓度低有稀疏的孔径也可提供营养使肿瘤细胞形成细胞球，同时可加入其他药物或细胞因子设置不同对照，

2 回答1186 围观

问WB 的试剂准备应该自己配制还是买试剂盒？能给点建议吗？

momimimimomi

做WB实验比较花钱的是一抗，国外进口的1支大概在3000元-5000元之间不等（根据你的指标而定），二抗价格相对便宜很多，如果使用荧光二抗的话，1瓶Dylight 2000元的可以使很久。剩下的试剂均可以单独购买，Marker、蛋白酶抑制剂、磷酸化蛋白抑制剂最好买进口的，价格可能在1000元-3000元左右（根据公司、规格），剩下买国产的即可，如裂解液、电泳液、电转液、Tris-Hcl、SDS-P

2 回答1888 围观

问荧光免疫 PCR 用什么仪器获得不同颜色标记的结果？

苍狼-huahua

现在市场上的PCR仪器多种多样，各自采用获取荧光标记结果的方式大不相同。现在潮流方向是用荧光探针(带有标记基因的片段和荧光基团)参与聚合酶链反应，当荧光强度达到机器可以判读的阈值，系统的原始扩增曲线就会上扬。

2 回答1304 围观

问如果用小鼠肝细胞免疫兔子应该怎么进行或是要怎样处理肝细胞呢？

huangjuan711

我好像只听过单克隆抗体，大三医学生路过。要得到抗体，自然是相应抗原的诱导了，哦，好像是先得到能产生目的抗体的基因，在整合到受体细胞基因，也有质粒携带的，然后抗原刺激，看是否表达目的抗体，再行筛选克隆成功的受体细胞，传代培养。有专业书籍介绍的吧

1 回答1024 围观

问为什么我跑出来的 PCR 条带在起跳前会有那么多小锯齿样波动，而人家的就是光滑的直线？

sayid

注意看你的荧光曲线图的纵坐标数值，是不是很低（正常几万到几十万，你的是不是只有几千或者更低）？是不是你的曲线最终达到平台期后的数值很低。你这种情况多数是因为模板含量低或引物扩增效率低，没有出现强扩增，信噪比太低，起跳前的背景信号被放大出现杂波。因为信噪比大，检测信号其实很不准确，两孔差异就大了。建议换模板或者换引物，或者看看有没有其他体系添加失误的问题。

1 回答1458 围观

问我觉得肿瘤淋巴结转移主要是细胞吞噬的结果（免疫细胞将肿瘤细胞带入淋巴结），如何实验呢？

1 回答1016 围观

问跑 PCR 时条带出来了，可 marker 没跑开是什么原因？

我是金博士

marker没跑开主要有这几个原因：marker上样量太多，胶的浓度问题，marker自身问题，跑胶时间不够。你可以换个marker或者减少上样量，多跑一下试试看。

1 回答5054 围观

问为什么 SD 大鼠神经干细胞培养时候会出现贴壁现象？

kudy

一般不会贴壁，贴壁的多是神经元样及胶质细胞

3 回答1291 围观

问FISH探针设计问题

3681 围观

问WB 定量测定光合酶 PEPCase，一抗怎么选择？

1691 围观

问为什么质粒DNA能在真核细胞里面表达？

3483 围观

问冻存组织如何解冻

fountain571

冻存的组织解冻后一般对微结构都有损伤如果后期再固定做组化的话不好

1 回答2749 围观

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