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问
蛋白放入-80之前还需要加蛋白酶抑制剂吗？
我是金博士
装冻存，避免反复冻融，尽快检测。不用加蛋白酶抑制剂
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问
提蛋白时将同组标本随机两两混合了，即（2con：2处理）。请问这样可以吗？
我是金博士
1、你为啥要这么写在文章中呢。。。2、这样做当然是可以的 3、别人的文献中肯定不会这些写撒
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问
从细胞提蛋白，浓度总是不高？
我是金博士
跑电泳染胶看看结果图可以放上来Bradford对很多东西比较敏感，比如urea
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问
WB 实验为什么会出现无目的条带？
我是金博士
膜上无蛋白，可能样品降解或者上样量太少了
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问
我用 CST 的 eNOS 一抗，RIPA(强)提取人脐静脉内皮细胞，做了几次了也一直没出来条带？
我是金博士
eNOS 这个不是很好做，呵呵内参做的很好？转膜后丽春红染膜了吗
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问
为什么 WB 实验的目的蛋白发的很慢，而且不太清楚？
我是金博士
1、发光慢，可以考虑换用Millipore的ECL2、15孔上样量有限制，大了会串孔
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问
WB 实验中二抗用 TBST 稀释液是否容易出现杂带？
我是金博士
1、稀释液可以放在4度，但是不建议超过一周2、回收的不能超过一周，如果超过一周放到-20冻存。我们都不回收的3、我们用BSA4、二抗还回收呢？我们从来不回收。为什么用TBST稀释会容易出现杂带？5、胶片比膜大6、用剪刀剪
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问
胶片定影之后显得有点暗，不够清亮是不是定影液的问题呢？
我是金博士
显影液的问题，10%与12%的胶跑出来的marker位置是不一样的。
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问
做目的蛋白时压出来都是白板，不知道为什么？会是目的蛋白的一抗有问题吗？
我是金博士
1、调整一下GAPDH一抗的浓度，试试1:10000,20000另外二抗也可能会带出杂带，你可以做一个不加GAPDH一抗，其他均加入的对照。2、这个不能直接断定一抗有问题吧，先确定你的系统是稳定再考虑一抗问题。
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问
Western 经常出现白板，连内参都不出来？
我是金博士
缓冲液的pH值，注意调教一下pH计
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问
为什么用四氯萘酚和 DAB 结合显色后，出现非常多的非特异性条带，而且背景显色一片？
我是金博士
1、直接DAB显色不行吗？2、二抗好像效果不好哦3、先直接用DAB试试，另外确认二抗没有带出来非特异性条带
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问
显影时背景很黑，我就洗了两天膜，然后又显影了一次，这次是白片？
我是金博士
最好stripping一下，背景很黑的话需要调整一下二抗浓度。
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问
SDS 凝胶上样缓冲液中样品不算体积吗？
1909 围观
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问
我在做Western Bloting时，加ddH2O稀释成，不知有影响吗？
1566 围观
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问
想保证上样量一致，那么调浓度时用什么溶剂稀释蛋白浓度呢？
5479 围观
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问
兔源和鼠源抗体在制作上有何区别吗？
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问
内参不显影，或者曝光30分钟才可见模糊的显影，请问是什么原因呢？
3265 围观
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问
WB看不到条带？
1506 围观
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问
虽然阳性样品能染出条带，但以前阳性质粒也没做出来，可能不会是转膜时间问题？
1 回答
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问
内参一直就几个样本条带清晰明显？
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