PT-PCR 两步法中为什么跑不出来曲线？
隋美娇
总RNA提取后，测试了浓度2640.32ng/ul 1.89ratio.
用CDNA合成试剂盒合成CDNA后跑PCR,
PCR程序
50℃,2min
95℃ 10min
(95℃ 15S
60℃ 60S 40个循环）
为什么始终跑不出来扩增曲线? 求大家指导
我已经尝试了不同的CDNA合成过程，用内参基因 B-action跑PCR，始终是一平的直线，好无助啊，求解？
1 个回答
sean18
有帮助
首先，应该是RT-PCR，不是PT-PCR。RT-PCR就4个基本因素模板、引物、PCR试剂及PCR条件。曲线一直都是平的，一点都没有，非常可能的一点是你的realtime PCR仪设置出问题了，滤片模式选择错误。
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