实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问各位大佬，鉴定大肠杆菌O抗原血清除了凝集法，还有其他快速的方法吗？

dxy_gwrp7ndq

酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行检查。

3 回答483 围观

问做实验需要的抗体如何制备？

天一湖医者

　抗体的制备为了研究抗体的理化性质、分子结构与功能，以及应用抗体于临床疾病的诊断、治疗及预防都需要人工制备抗体。目前，根据制备的原理和方法可分为多克隆抗体、单克隆抗体及基因工程抗体三类。一、多克隆抗体　　大多数抗原是由大分子蛋白质组成，但只是抗原上有限部位的特殊分子结构能与其相应抗体结合，称此部位为抗原决定簇（antigenic determinant）或表位(epitope)。一种天然抗原

3 回答1067 围观

问大肠菌群实验结晶紫培养是阳性，需要煌绿乳糖胆盐肉汤实验验证吗

Topmicro

需要，从结晶紫中性红胆盐琼脂平板上挑选可疑菌落分别接种到煌绿乳糖胆盐肉汤管内培养，观察产气情况进行验证。

5 回答548 围观

问原代细胞传代后出现杂质

天一湖医者

黑点的出现可能与以下几种情况有关： (1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸; (2)血清质量不好，反复冻融的结果; (3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长; (4)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

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问为什么co-ip空载/IgG组也有条带？

府宅

可以降低Ig抗体量，缩短了实验和对照组的时间

4 回答3640 围观

问铺板细胞聚集在中间是为什么呢，如果用这样的板转染会咋样呢？

whilt-shirt

铺板后需要画8字，不管横8或者竖8，如果细胞未铺匀会影响转染效率

4 回答353 围观

问想问一下从PBMC中分离的NK细胞体外培养扩增发育的方法（除用工程细胞K562外)

天一湖医者

将 PBMCs 和偶联有 NKp46 单抗和 CD2 单抗的 Cloudz™ 凝胶微珠共同孵育，该步骤将激活 NK 细胞，进行扩增。

3 回答853 围观

问求载体构建的完整步骤和需要注意的事项哇

dxy_gwrp7ndq

载体构建的注意事项：1．连接反应是 DNA 重组过程中的关键步骤，其成败的重要参数之一就是温度，因此要控制好连接温度。2．进行黏末端连接时，会产生一定数量的载体自身环化分子，导致转化菌中过高的假阳性克隆背景。针对这一问题，常采用牛小肠碱性磷酸酶（ CIP ）去掉载体的5’﹣磷酸以抑制 DNA 片段的自身环化。

3 回答689 围观

问为什么我600+bp的模板pcr出来1200bp的片段，还找不到多余片段来源？

bamboopiggy

你的模版是质粒还是genomic Dna？你换过引物，说明你也怕引物match不上，要不你试试缩短extension的时间？

3 回答572 围观

问asc寡聚化实验总是有问题😭

bamboopiggy

将沉淀重悬于 50 μl CHAPS 缓冲液中，其中含有 4 mM 辛二酸二琥珀酰亚胺（溶解在 DMSO 中）。在室温下孵育 30 分钟以交联蛋白质。在 4 °C 下以 5,000 x g 离心 8 分钟，弃去上清液并将沉淀重悬于 30 μl 的 2x 蛋白上样缓冲液中。在 95°C 下加热样品 2 分钟。应该就可以

1 回答2826 围观

问蛋白条带的问题求助，各种有问题的条带

喵喵喵柏

不知道你具体的问题是什么第一张图的右下角你应该是有一个气泡，所以条带上面有一个小白点如果你的问题是他不是单个的条带，有很多条带的话，需要看一下你的抗体是不是多克隆的剩下的几个你可以调整一下，把背景跟条带的对比度调的大一点最后两张膜你应该是发光的时候折了一下膜，膜上有折痕就会出现这种印记

2 回答572 围观

问免疫荧光一抗没在摇床上过夜，就只在四度静置过夜会染不上吗？

dxy_gwrp7ndq

不保证能均匀敷上，效果会不好。

3 回答3705 围观

问qRT-PCR结果中复孔的cq值相差多少不可用？

cxsm

对于含量较高的基因来说，个人认为能接受0.5以内的差值吧，一般32个循环以后的基因，基本可以不用考虑了，除非处理之后有极大的变化，CQ值变小到30以内就0.5以内还可信，CQ变大了，最多1吧，放弃吧别考虑了

3 回答2559 围观

问用trizol提取总RNA时，在加入氯仿前的步骤都可以放在置于冰上的板子室温静置么？组织加入裂解液后室温放置与插入冰块中有区别么

府宅

上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,其余步骤在冰上操作

3 回答769 围观

问流式检测未经处理的肿瘤细胞的钙网格蛋白的水平，为什么本地就很高

府宅

推荐染色时添加FcR block，加去死细胞染料另外阴性对照用同型抗体

2 回答404 围观

问碧云天核蛋白提取试剂盒提取后为什么跑wbnrf2蛋白无条单laminb也没有？

bamboopiggy

1.你跑whol lysit的对照了么？对照有条带吗？2.这俩抗体你以前用过吗？切的位置对不？二抗有没有用错？现在提核的技术很稳定,碧云天的盒子应该可以用，不行的话，你买个thermo的盒子试试。那个我用过，没问题的

3 回答506 围观

问双酶切产物OD值过高可能是什么原因?

bamboopiggy

胶回收的260，280没法看的，只是能给你提供参考浓度，算你的插入片段和backbone的比例。

3 回答1063 围观

问预染marker是怎么操作的呀？请问

biotides001

各厂家都有说明书，可以参照说明书或者问师兄师姐

7 回答699 围观

问SDS-PAGE跑胶这个是缓冲液的问题吗？

bqejjh123

要么胶的浓度有问题，不同浓度的胶适用的分子量大小不太一样，自己查查，要么电泳缓冲液有问题，重新配新的，还有点样量少一些。跑的时间在长点。祝顺利

7 回答915 围观

问细胞复苏之后不贴壁

biu2266

复苏血清浓度要提高，细胞密度最好增加

3 回答2850 围观

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