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问
疏水及方向层析和凝胶排阻层析提纯蛋白方法的各自适用于什么情形?
天一湖医者
巯水及方向层析:疏水层析也称疏水作用下层析(从分离纯化生命物质的机制来看,也属于吸附层析一类。疏水层析和反相层析分离生命物质的依据是一致的,利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离。该方法基于的是蛋白质的疏水差异,在高盐溶液中,蛋白质会与疏水配基相结合,而其他的杂蛋白则没有此种性质,利用此种性质,可以将蛋白质初步的分离,用于盐析之后的蛋白质进一步提纯。凝胶排
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问
脱脂奶粉中含生物素,如果实验中有涉及到“生物素”时需要注意什么?
bamboopiggy
脱脂奶粉中含有少量的生物素和碱性磷酸酶残留,在使用生物素-亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗时,也会产生高背景或使得本底水平增高。
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问
一抗,二抗的比例是比较重要,怎样调整好一抗,二抗的比例?有没有经验分享一下,谢谢
bamboopiggy
一般,拿到一抗就先1:1000 试一下,如果浅就改1:500.如果深,就改1:2000,基本差不多,二抗,问卖给你的公司,他们一般有个参考值,有的1:4000,有的1:1-2万。
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问
抗体工作溶液可以储存反复使用吗?
bamboopiggy
看你用的频率,如果每天都用,至少可以反复用三次,如果不是每次都用,可能一周左右还是可以再用的。
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问
转膜液加甲醇的目的是什么?
bamboopiggy
甲醇加到转移缓冲液中主要有两种作用:1.稳定凝胶的大小,2.除去与蛋白质分子复合的SDS.
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问
电泳时 Marker 总跑不全所有条带,即使用增大胶浓度仍不全?
bamboopiggy
一般用10-180kd的marker,在10%的胶上是可以跑全的,看你的实验目的,不行可以买预制胶,有梯度胶,显示所有的marker在10180之间。
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问
抽提的质粒DNA电泳时怎么出现基因组DNA的污染?
bamboopiggy
加buffer2 裂解大肠杆菌的时候,操作轻柔,一定按照kit的说明书给的时间,及时加入buffer3,终止裂解。否则就会出现genomic DNA的污染。
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问
加样时DNA飘出加样孔外?
bamboopiggy
你将DNA和loading buffer混合以后再往胶孔里面加啊,注意loadingbuffer的浓度。
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问
B16细胞离心之后的细胞颜色
bamboopiggy
B16就是黑色素细胞瘤,在细胞多了以后,培养的上清都会变成黑色的,是细胞产生的黑色素增多所致,没问题。
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问
如何提取细胞表面蛋白质呢?
bamboopiggy
去买一个试剂盒,可以直接提,可以去thermo的官网看看,好多可以用的试剂盒,便宜的碧云天有。
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问
细菌的透射电镜染色该怎么做呢?
bamboopiggy
染色之前,当然要固定,最好这个你找专门做切片的技术员帮你弄。
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问
原代细胞过表达某基因能做稳转嘛
bamboopiggy
能活15代的话,做稳转没问题,稳转,一般筛2周差不多就筛出来了。
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问
请教这个文献中唇颈环HE染色结果怎么看,是通过什么看出上皮组织组织损伤的呢?
bamboopiggy
因为好奇,我直接调出来原文看了一下: Black dashed lines with arrowheads outline the region of tissue damage in (P) and (Q) upon Srsf1 (P) and Srsf3 (Q) deletion, respectively. Dashed lines outline laCL---带箭头的黑色虚线分别勾勒出
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问
核算斑点杂交,显色问题
天一湖医者
应少量屡次点样,防止样品外渗,不利于观察显色.将杂交膜封入杂交袋中,参加杂交液,应尽量除去气泡再封口.防止杂交不完全,显色不明显.
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问
做WB时一抗洗完一定要马上敷二抗吗?
府宅
要立马敷二抗,如果不洗,一抗可以过夜,但洗完之后就要马上敷二抗,要不会影响结果
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问
各位大神,细胞因子检测的ELISpot实验数据如何处理呢?为什么我看其他实验室的小伙伴们都乘以1.25呢,这个系数是如何定的呢?
天一湖医者
ELISpot实验数据结果采取为斑点计数(可人工计数,也可用自动读板仪计数)
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问
病毒感染滴度IFU检测时,在加甲醇固定过程中,有明显的白色细胞悬起来正常吗?
cxsm
正常情况下甲醇固定的时候,细胞会变白,死细胞在你去培养基的时候基本会带走,有可能是你加甲醇的时候把细胞冲起来了。
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问
跑蛋白的时候一定要复温吗
liuyuqiang886
不用,只要解冻后混匀即可。亲试做了好多年没有复温,结果很好!
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问
实验室养的昆明雄鼠每次看都有死亡如何避免?
动物实验小白
我好像知道为啥了,应该是喂食量少
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问
小鼠乳腺癌模型建立选用哪个细胞株比较好?
susul1982
若是Balb/c小鼠的话,用D2F2小鼠乳腺癌细胞
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