实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问MS1和MS2两个谱图的区别有哪些

天一湖医者

MS1信息的准确性，取决于很多因素，比如色谱的喷雾足够稳定、样品的纯净度高，严格控制污染等等，这些条件都满足了，才能得到比较完美的一级定量信息，这对后续的定性定量分析都会有帮助。样品的前处理和质谱的维护这两个关键的因素，一定要把握好，如果有影响，那么在后续的数据分析中，任何统计方法搜库方法都无法挽回先前的污染信息。MS2简单讲就是将一条完整肽段送入质谱进行打碎之后得到的信息。我们的碎裂过程一般来说

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问想研究甲醛致白血病的机理，请问有哪些白血病的细胞株？

天一湖医者

白血病细胞株具体来说有八十多种。如：人红系白血病细胞 TF-1、人慢性髓系白血病细胞 K562、人急性混合型白血病细胞 HAL-01等等。

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问在NCBI上检索RORγt的RNA编码，发现有isoformX1、2、3和4这四种型别？请问该怎么选？

bamboopiggy

选四个isoform都包含的片段来检测rna，除非你的组织中有多种isoform，你又要区分

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问疫情期间，如何采购国外的产品

dxy_gwrp7ndq

可以在网站购买或通过外贸代理公司采购，各课题负责人及实验人员采购前填写《科研用进口试剂、仪器设备备案表》，交至所属实验室，实验室定期至医院感控办备案，医院将根据具体采购物品种类进行抽检。

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问免疫组化二步法里面的枸橘酸盐缓冲液，是不是就是柠檬酸盐？这缓冲液的作用是干什么？什么原理呢？

天一湖医者

枸橼酸就是柠檬酸,叫法不同而已.没有区别的,只是一些书上习惯用枸橼酸盐缓冲溶液的称谓.当然,柠檬酸缓冲溶液的配制考虑两个因素：指定的PH值是什么?在指定PH值下,柠檬酸及其盐的总浓度是多大.因为PH值不同,则共轭酸碱对的摩尔比是不同的,而PH值相同,摩尔比相同,但总浓度不同时,缓冲能力也是不同的. 这是配制时要确定的两个指标.

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问s1-PFGE和DNA探针实验及接合转移实验这一系列流程是否有其他简单实验可以替代，测定耐药基因的水平基因转移。

府宅

可以利用单细胞拉曼反向D2O检测方法能够可靠且快速的从表型上追踪耐药从环境到临床的扩散。方法具有很高的灵敏度，能够在大量受体菌种识别出那些少量的抗性转化子。

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问培养的细胞总是污染怎么办

未来9

细胞污染的主要原因包括：操作技术不严格、试剂质量不达标、大气中孢子计数增加、养箱或操作台使用和维护不当等。因此，在细胞培养过程中，操作者不仅要严格遵守标准的操作程序，同时还要特别注意新产品、新品牌、以及设备的清洁维护。同时，及时检测并鉴定细胞是否被污染同样至关重要。

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问想问大家小鼠原代骨髓间充质干细胞用的什么培养基呢？

府宅

小鼠骨髓间充质干细胞可以用Hclone的DMEM,10%FBS培养基

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问实验室羊水细胞接种后需要10天以上才能贴壁的原因

府宅

羊水细胞培养所需时间较长培养成功率低，国内有些学者通过添加生长因子或用血清代用品来培养羊水

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问加显色剂后“花板”的原因和解决办法

府宅

洗板次数不够或洗板浸泡时间过短也会因洗板不浄造成“花板”

3 回答508 围观

问PPAR gamma主要在哪表达

未来9

在啮齿类动物中,PPARγ 主要在脂肪组织中表达,而在人体,除脂肪组织外,在巨噬细胞以及其他脂肪贮存细胞,如肝、肾、肺及直肠中均有表达

4 回答1007 围观

问严格厌氧菌怎么确定其量呢？平板计数么。

府宅

双歧杆菌等严格厌氧菌采用双层平板计数法

2 回答707 围观

问奶粉在wb中起到什么作用用别的什么代替呢？

府宅

BSA成分单一，是常用的封闭试剂，二抗稀释液中不含有BSA或者脱脂奶粉血清等，可能会导致二抗与之结合，降低二抗的结合力。

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问跑wb时候电压用多少v比较好什么时候变

未来9

电压条件我们经常用的浓缩时80V,分离时100V比较好,条带很平

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问目标蛋白和内参要在一张膜上曝光吗？

府宅

可以分开曝光，这样的话可以避免以为两张膜因为荧光的强弱差别太大导致曝光时间顾此失彼，根据你的情况你可以将蛋白上样跑胶后，根据marker将目的蛋白和内参分开切下来，并用不同时间或条件分别转膜后在曝光，这样的话就可以进行比较了。

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问请问跑wb时候你们用PVDF膜还是NC膜有什么区别

天一湖医者

硝酸纤维素（NC）膜与蛋白质之间靠疏水作用结合，无需预先活化，对蛋白质的活性影响小；非特异性本底显色浅；价格低廉，使用方便。但结合在NC 上的小分子蛋白质在洗涤时易丢失；NC韧性较差，易损坏。聚偏二氟乙烯(PVDF)膜与蛋白质亲和力高，用前需在甲醇中浸泡，以活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电荷蛋白结合。根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔径的NC膜。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白

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问WB条带形状是圆形不是条形怎么办

bamboopiggy

如果有趋势，可以直接用，没事，估计是你胶灌的不匀

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问电转液需要加多少甲醇？

lijUn5895

标准的湿转缓冲液和电泳缓冲液一样，为不含SDS 的1X Tris-gly 缓冲液，加入甲醇至终浓度20%。如果转膜的蛋白分子量大于80kDa，则推荐加入SDS 使之终浓度为0.1%。

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问高温能杀死大肠，为什么饼干烤好后，检测还有大肠？什么原因可以造成？又怎么可以完全制止大肠？

Topmicro

高温确实能够杀死大肠，饼干烤好后检测到的大肠多来自包装污染或包装中间过程的污染，做好包材、包装机和操作人员的消毒工作可以有效防止大肠杆菌污染。

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问想问一下用Krytox和PFH材料制备纳米液滴，在透析除盐的时候为什么会出现沉淀呀？感觉是这些纳米液滴聚集在一起了。

lijUn5895

蛋白透析产生沉淀可能有以下原因：1.由高浓度的蛋白变性试剂(如8m尿素)，到低浓度，再到不含变性剂的buffer，如果条件变化剧烈，使得蛋白不正确折叠而沉淀，这种情况比较常见。如果选择透析的方法，一定要多加几个中间浓度梯度，而且注意低温(4度)，这有利于蛋白正确折叠。2.透析袋本身有一定的吸附，可以通过磁力搅拌来降低吸附。3.透析液PH靠近等电点，像catzp说的，换buffer。4.透析袋不干净

3 回答612 围观

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