做WB时一抗洗完一定要马上敷二抗吗？

不是，可以放在4° 暂停一下 但是放的时间过长可能会有影响

每一个步骤都不能干板时间过长，容易失活。

进行免疫蛋白印迹实验时，酶接触后的抗原抗体复合物，是属于比较牢固的抗原抗体复合物，但要洗脱掉游离和多余的抗原成分，然后再进行另一种，抗抗体和抗原的结合，以避免由于放置时间过长，效价过低而影响到结合

要立马敷二抗，如果不洗，一抗可以过夜，但洗完之后就要马上敷二抗，要不会影响结果

洗完后马上敷相应的二抗，不要拖

可以，洗完一抗4度，第二天再加二抗，但是要不带tween的有液体，如tbs泡着