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猪肺原代巨噬细胞适合什么培养基,1640还是高糖
bamboopiggy
巨噬细胞一般算悬浮细胞,适合用1640养
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问
原代猪肺巨噬细胞最长可以培养多长时间,有传代的可能吗
Eason老歌迷
一般都是原代培养。如果养的好,可以存活差不多两到三周吧。
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问
细胞冻存推荐密度是多少?如何配置所需冻存液
Eason老歌迷
冻存液的大致的配置方法:冻存液=10% DMSO + 90% FBS。但是呢,这个比例,各个实验室都是不一样的,因人而异吧推荐细胞数100-300万/ml
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问
his标签纯化目的蛋白跑胶呈现出拖尾的现象同一个胶其他样则不这样原因是什么呢?
bamboopiggy
感觉是你纯化蛋白上样浓度有点大,所以才出现了拖尾。
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问
成球实验培养的细胞球可以冻起来么
bamboopiggy
你最好把细胞球弄成单细胞悬液再冻起来,否则会损伤细胞球中间的细胞的。
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问
请问成球实验培养的时候需要一直摇么
bamboopiggy
sphere成球实验,不需要摇,但是需要用低吸附的培养板。,
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问
拟南芥T3代悬浮细胞,第九天显微镜镜检全部死亡了,温度和光照自己摇床速率都是正常的,本人第一次养细胞,想问下大家这是什么原因呢?
Eason老歌迷
别着急,遇到这种情况,先观察一下细胞的形态,来大致判断一下是什么原因导致的。如果培养基变黄,可能是营养不足,需要你及时更换。同时也可能是细胞污染,主要是细菌污染,支原体污染,黑胶虫污染,病毒污染等,
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问
如何从细胞形态学上准备判断细胞是否已经老化了。
Eason老歌迷
可以使用细胞衰老检测办法。每张片子镜下计数四百个细胞,确定X-Gal染色阳性细胞(衰老细胞)在细胞群体中的所占的百分比即衰老细胞率(蓝染细胞数/总计细胞数×100%)。即可算出。
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问
有什么方法能区分凋亡,坏死,焦亡吗?
bamboopiggy
分别加入凋亡,坏死和焦亡的抑制剂,看那个能rescue你的细胞,你的细胞就是哪种死亡方式。
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问
细胞抱团该如何处理?
Eason老歌迷
如果是贴壁很牢固的细胞,可以多批多次进行消化,这样可以很大程度降低胰酶对细胞的损伤,避免细胞抱团。不要整太高的细胞密度,细胞生长密度过高也比较容易形成细胞成簇,百分之七十到八十的密度就好,这样可以降低细胞抱团的几率。如果是肉眼可见,可先让细胞静置30秒左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,也没啥好办法,重新培养吧
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问
细胞不贴壁,怀疑是血清的问题,更换血清后,效果依然不好,还可能是什么原因导致的?
Eason老歌迷
细胞不贴壁有很多种原因导致的,你可以从多个角度来看。比如说是不是胰蛋白酶消化过多啊?是不是存在细胞污染,比如说支原体污染啊。或者你的培养基的问题,培养基pH值过碱;还有接种细胞起始浓度太低或太高啊。等等都可能引起
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问
DF1细胞张速过快,怎么办?
dxy_dfcqaej4
1.降低细胞密度2.培养基血清降一下
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问
HD11细胞系很难活过60小时原因?
bamboopiggy
永生化的细胞系如果活不过60h,就要考虑培养条件的问题,HD11细胞系的培养条件:DMEM/F12培养基,90%;优质胎牛血清,10%。培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
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问
转染时细胞总是死的太多,而且细胞状态不好,形态也发生了变化,请问你们转染时细胞铺板会铺多少细胞呢?可以根据类型提供一下参考嘛?
bamboopiggy
看你用哪种转染试剂,按照转染试剂说明书推荐剂量进行操作
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问
想问下各位大佬:M-CSF诱导小鼠骨髓来源的BMDM,诱导完成后,种板的细胞培养基中还需要给予M-CSF嘛?
bamboopiggy
这个不是加不加MCSF的问题,而是BMDM不可传代,不可用胰酶消化,建议直接铺板,进行诱导,诱导后直接进行实验,不易过长时间培养,会恢复原来的圆形形态。
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问
[求助]肠神经元原代培养
天一湖医者
可以参考下这个文献https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=738210c5983acc2c5f8741f441763fcc
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问
收集鳟鱼胚胎提取物时,经过胚胎融化、过滤、离心厚,收集到的上清液,怎样稀释到理想蛋白质浓度?
我也是锦鲤ye
测量蛋白质浓度,用 LDF 将提取物稀释至理想的浓度。
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问
使用胰蛋白酶加入EDTA是为什么?
dxy_nkqusvl2
EDTA是一种可以螯合Mg2+、Ca2+的螯合剂,细胞表面很多结合蛋白都带有这个Ca2+,因为Ca2+的作用细胞之间还有细胞与培养瓶之间才能连接,所以加入EDTA能有效率的将细胞从培养瓶上消化下来。
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问
请问下培养液第一次和第二次配的颜色不一样 还能用嘛?右边是第一次配的左边是第二次配的
异乡人hyq
应该可以用的,估计与高温灭菌产生少量碳化有关。
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问
提取的蛋白有少量沉淀那可以有什么办法补救一下吗?
Eason老歌迷
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀,建议蛋白浓缩后的最终浓度不要超过20mg/ml。如果已经出现沉淀,可以改进一下实验方法:1、离心力降低为原来的20-50%,2、改用截留分子量更大的超滤膜,3、在浓缩过程中取出超滤管,用枪头反复吹吸几次再继续浓缩,4、体积较大的样品可考虑选用超滤杯,减少沉淀的发生。据我所知,没啥补救
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