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问
有什么评价瞬转效率的方法吗(质粒进入细胞的多少)?而不是瞬转后蛋白表达效率。
bamboopiggy
转个带荧光的空质粒,可以根据荧光的强度,来判断瞬转的效率。
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问
慢病毒感染293S悬浮细胞,感染效率低,有什么提高感染效率的方法吗?除了离心
bamboopiggy
提高一下病毒浓度试试,可以用PEG8000来浓缩病毒。
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问
用RIPA提取总蛋白为什么会有粘稠的不可溶沉淀?是什么?如何解决?
dxy_gwrp7ndq
产生粘稠物的主要原因是RIPA不能将所有样品全部裂解,产生的不可溶组分中主要含有核酸残团,细胞碎片(有些组织样品还含有油脂),和部分蛋白,因此RIPA提取的仅仅是可溶性蛋白,并非真正的总蛋白。
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问
如图,培养皿培养12h出来的,是什么东西?
bamboopiggy
感觉很漂亮的一个菌,这皿细胞别要了
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问
流水细胞中细胞死亡有点多?
bamboopiggy
可能使细胞浓度低,通过的速度太快,对细胞损伤大,最好提高一下细胞浓度,或降低一些通过速度,
4 回答
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问
流式细胞分选速度如何确定?
bamboopiggy
这主要取决于要求通过的细胞的数目,如果你的细胞密度高,就可以降低一下速度,细胞密度低,就要加速,对细胞损伤就大一些。
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问
通过免疫组化或免疫细胞化学的方法检测组织或细胞中的Bcl-2,底物颜色没有变红是因为什么?
bamboopiggy
要么你反应过程中有步骤做错了,要么是bcl2在你组织中表达量低
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问
远志对小鼠的祛痰作用机制是什么,为什么是灌胃而不是注射
bamboopiggy
远志中含有丰富的植物皂甙,这种物质可以作用于能胃粘膜,刺激胃粘液的分泌,引起患者产生轻度恶心的感。 呕吐感形成以后,就刺激支气管产生连锁反应,分泌更多的物质来祛痰,所以对于痰多不化的人去,有较好的改善作用。所以这个玩意,要刺激胃黏膜,需要灌胃
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问
慢病毒稳转293细胞后,有的细胞会变大,有空泡状,是什么原因呢?
bamboopiggy
慢病毒对293细胞是有影响的,如果变大的细胞,和空泡的细胞不多,那就不用管,如果细胞数目多,需要降低加入病毒的浓度。
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问
fed batch过程中细胞数过多怎么降低细胞数提高活率
dxy_gwrp7ndq
可以适当提高补料渗透压,减缓细胞生长
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问
质粒转染过程中对转染细胞的要求有哪些?
dxy_gwrp7ndq
转染时细胞密度以 70~90%(贴壁细胞)或 2×106~4×106细胞 / mL(悬浮细胞)为宜,细胞密度过高会严重影响细胞状态(周期进程阻滞,凋亡增加等)
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问
表达量高的亚克隆细胞,个头特别大,一般细胞直径在16-17左右,但是它能到20左右,而且细胞数少,有什么方法可以降低细胞直径
bamboopiggy
是不是你的这个基因影响细胞的size?你可以直接挑出单克隆,进行单独培养,看看是否和正常的有差异。
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问
如何培养血管内皮细胞?
丁香清香
培养血管内皮细胞所用培养基与大动脉内皮细胞培养基相同,脐带静脉内皮细胞、大动脉内皮细胞易于培养,既使不加生长因子在最初几代细胞也会增殖良好。
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问
实时荧光定量PCR进行HRM曲线进行分析HRM的温度条件应该如何诱导异源双链的发生?
未来9
利用PCR缓慢变性: 95℃变性5分钟,然后以 0.03℃/S速率缓慢复性至25℃,使杂合子形成异源双链
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问
在做实时荧光定量PCR中的基因分型,在扩增体系中加入石蜡油和甘油有什么样的好处?
天一湖医者
石蜡油,甘油具有良好的渗透能力,可以进入细胞内部和胞内大分子形成氢键以取代干燥脱除的水分,从而维持蛋白质、碳水化合物及脂肪等大分子活性物质的原有结构。此外,还可以起到降低细胞脱水皱缩和缓解复水肿胀的效果。另外醇和糖类相似均具有醇和糖类羟基官能团,均能产生“优先水化作用”以及改变体系的玻璃态转变温度等,故在发挥保护效果方面和糖类具有一定共性。须知蛋白在使用时候存在冻融情况下建议可以选甘露醇、右旋糖酐
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问
实时荧光定量PCR,扩增后进行链熔解曲线基线高且杂峰较多怎么回事?
bamboopiggy
melt curve杂峰多,说明你的primer不特异,有非特异产物的产生
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问
培养的细胞为什么总是一言不合就抱团,吹打之后也还是会这样?有什么很好的办法解决这一问题吗
丁香清香
引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。
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问
细胞培养过程中碰到的小黑点,到底是什么啊,一直都有
丁香清香
在细胞培养中常可见到细胞及培养液中有一些大小不等、形态不同的黑色未知颗粒。有可能是细胞碎片或者污染如:支原体、真菌和寄生虫等
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1128 围观
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问
分选纯度的影响因素有哪些?
bamboopiggy
标本制作要轻柔,最好提前做个预实验,不要上来就直接做
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问
C2C12细胞分化的时候每次肌管分化的都不是很好,而且方向很杂乱,是什么问题啊?然后分化培养基中马血清浓度怎么选择啊各位大佬?
bamboopiggy
将1×105个细胞接种于6孔板,待细胞密度达80-90%时开始更换为成肌肉诱导培养基:含2%马血清、10µg/ml胰岛素的DMEM培养基,隔天换液,于诱导后5天,可见细胞分化成多核的肌纤维--这是我师姐用的方法。
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