实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问原代猪肺巨噬细胞最长可以培养多长时间，有传代的可能吗

Eason老歌迷

一般都是原代培养。如果养的好，可以存活差不多两到三周吧。

3 回答1047 围观

问蛋白条带有点弥散，这种情况怎么解决

bamboopiggy

没事，这样就可以用，条带还是很好的

3 回答1921 围观

问细胞冻存推荐密度是多少？如何配置所需冻存液

Eason老歌迷

冻存液的大致的配置方法：冻存液=10% DMSO + 90% FBS。但是呢，这个比例，各个实验室都是不一样的，因人而异吧推荐细胞数100-300万／ml

4 回答6168 围观

问MTT的OD值有的说要在0.1-0.7，有的说要在0.8-1.2之间，到底要在什么范围呀，求指导！

bamboopiggy

这个只要能说明你实验的问题，没有必要太纠结，差不多0.5-1.0就可以

3 回答2623 围观

问请问成球实验培养的时候需要一直摇么

bamboopiggy

sphere成球实验，不需要摇，但是需要用低吸附的培养板。，

2 回答260 围观

问拟南芥T3代悬浮细胞，第九天显微镜镜检全部死亡了，温度和光照自己摇床速率都是正常的，本人第一次养细胞，想问下大家这是什么原因呢？

Eason老歌迷

别着急，遇到这种情况，先观察一下细胞的形态，来大致判断一下是什么原因导致的。如果培养基变黄，可能是营养不足，需要你及时更换。同时也可能是细胞污染，主要是细菌污染，支原体污染，黑胶虫污染，病毒污染等，

1 回答202 围观

问如何从细胞形态学上准备判断细胞是否已经老化了。

Eason老歌迷

可以使用细胞衰老检测办法。每张片子镜下计数四百个细胞，确定X-Gal染色阳性细胞（衰老细胞）在细胞群体中的所占的百分比即衰老细胞率（蓝染细胞数/总计细胞数×100%）。即可算出。

4 回答927 围观

问细胞支原体污染如何治疗与预防

Eason老歌迷

如何避免支原体污染:首先肯定是要做好细胞间消毒，确保操作时没有污染，做到正确操作，确保你的细胞培养操作器械无菌，可以在培养基中加入适量抗生素。出现支原体污染该如何应对:对于非重要的细胞，如培养中的细胞、WCB的细胞等，将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。比较重要的细胞，用清洗纯化法清除支原体污染。

4 回答402 围观

问有什么方法能区分凋亡，坏死，焦亡吗？

bamboopiggy

分别加入凋亡，坏死和焦亡的抑制剂，看那个能rescue你的细胞，你的细胞就是哪种死亡方式。

3 回答738 围观

问细胞抱团该如何处理？

Eason老歌迷

如果是贴壁很牢固的细胞，可以多批多次进行消化，这样可以很大程度降低胰酶对细胞的损伤，避免细胞抱团。不要整太高的细胞密度，细胞生长密度过高也比较容易形成细胞成簇，百分之七十到八十的密度就好，这样可以降低细胞抱团的几率。如果是肉眼可见，可先让细胞静置30秒左右，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见，也没啥好办法，重新培养吧

4 回答715 围观

问细胞不贴壁，怀疑是血清的问题，更换血清后，效果依然不好，还可能是什么原因导致的？

Eason老歌迷

细胞不贴壁有很多种原因导致的，你可以从多个角度来看。比如说是不是胰蛋白酶消化过多啊？是不是存在细胞污染，比如说支原体污染啊。或者你的培养基的问题，培养基pH值过碱；还有接种细胞起始浓度太低或太高啊。等等都可能引起

4 回答497 围观

问在对细胞进行梯度给药给药时，母液是用水配的，浓度过低，那么在用培养基稀释药物时，细胞最低能接受稀释多少倍才能保证渗透压不受影响？

Eason老歌迷

这个要自己先算好浓度，稀释时可以用培养基，加多少量自己一定要算好。绝大多数细胞对渗透压有一定耐受性。就拿人的来说吧，人的血浆渗透压约为290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。而对比来看，鼠细胞渗透压则是在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260－320mOsm/kg的范围都适宜。

3 回答507 围观

问细胞培养过程中，细胞周围包括细胞上有很多小黑点，怎么办?

Eason老歌迷

看到有小黑点，可以这样做:先要用肉眼去观察培养基是不是混浊。然后在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是不是能游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

3 回答563 围观

问病料存放旧后测rna数值偏差大是操作不当还是污染可能性大？

迟C迟

样品放久了测OD不准，可能是RNA已经降解了，测出来估计是污染了。

3 回答369 围观

问HEK293细胞或CHO-K1细胞在摇瓶培养

Eason老歌迷

第一，换液时动作要轻。第二，293细胞在低代时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用PBS冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液。第三，刚复苏的293贴壁很慢，复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适。

4 回答620 围观

问DF1细胞张速过快，怎么办？

dxy_dfcqaej4

1.降低细胞密度2.培养基血清降一下

3 回答354 围观

问HD11细胞系很难活过60小时原因？

bamboopiggy

永生化的细胞系如果活不过60h，就要考虑培养条件的问题，HD11细胞系的培养条件：DMEM/F12培养基，90%；优质胎牛血清，10%。培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

2 回答912 围观

问请问养细胞过程中受到真菌污染该怎么处理？

迟C迟

CO2孵箱被真菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用无气味杀孢子剂擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把杀孢子剂喷洒成雾状，使其蒸汽弥漫。待杀孢子剂的气雾消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。预防真菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制真菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制真菌素或放

4 回答1130 围观

问转染时细胞总是死的太多，而且细胞状态不好，形态也发生了变化，请问你们转染时细胞铺板会铺多少细胞呢？可以根据类型提供一下参考嘛？

bamboopiggy

看你用哪种转染试剂，按照转染试剂说明书推荐剂量进行操作

2 回答980 围观

问想问下各位大佬：M-CSF诱导小鼠骨髓来源的BMDM，诱导完成后，种板的细胞培养基中还需要给予M-CSF嘛？

bamboopiggy

这个不是加不加MCSF的问题，而是BMDM不可传代，不可用胰酶消化，建议直接铺板，进行诱导，诱导后直接进行实验，不易过长时间培养，会恢复原来的圆形形态。

3 回答4208 围观

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