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问
AC16细胞在换T75瓶后,细胞状态很差,培养基没有变,这是啥原因?
Guoood
大概率是传代的时候消化过了,细胞状态变差。建议稀释胰酶,消化时镜下观察细胞变圆即可终止消化。
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问
细胞生长逐渐变慢是什么原因?
Guoood
细胞密度太低。传代时注意细胞密度不能太稀细胞代龄很高了,也就是细胞老了,随着代数增多,逐渐长的慢传代消化不能太久,容易损伤细胞,建议稀释胰酶,摸索合适时间
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问
细胞没有及时换液,传代,出现的团块是不是细胞污染
Eason老歌迷
出现这种情况,你需要大概的判断一下,把培养瓶或培养皿拿起来,对着光线检查,用肉眼看一看,是不是混浊,培养基有没有颜色变化。还可以拿显微镜观察一下,在高倍镜下可以观察到细菌,它们可能是棒状或球状,单独成链或成团存在,它们也可能和细胞混在一起。有可能已经发生了细胞污染,也有可能是操作不当引起的。
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问
细胞传两代后开始逐渐死亡的原因?
Guoood
传代不能过于频繁。建议等细胞长90%以上再进行传代,否则频繁消化细胞可能会损伤,可适当降低胰酶浓度,比如用灭菌PBS将胰酶稀释一半后使用。还有一种可能就是由于冻存细胞方式不对,复苏细胞质量比较差,不能很好的贴壁,可重新复苏一管好的细胞再试试!
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问
为什么我跑出来的蛋白很圆?
天一湖医者
可能上样量没点好,PAGE胶凝的时间短。
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问
请问怎么研究药物作用于细胞的方式是通过膜表面受体发挥作用还是进入细胞里面的呢?
bamboopiggy
你可不可以在你的药物上加上一个示踪的蛋白,然后confocal照一下就可以。
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问
跑wb,目的蛋白是p-p65,为何40附近的那条带明显
天一湖医者
原因:一抗非特异性与蛋白结合。解决办法:更换一抗。
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问
细胞离心下来的离心速率应为多少?
Eason老歌迷
离心速率一般为300×g(约1000rpm),以重力加速度g(980;s2)的倍数来表示单位。5 到10 分钟即可,转速过快,时间过长都将造成细胞死亡。
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问
流式细胞术如何进行荧光补偿?
天一湖医者
使用标准微珠确保细胞仪的性能符合规格。 利用未染色的样品设置荧光通道电压。调节前向和侧向散射光,以便清楚界定细胞群。在后续分析中,死细胞、细胞团以及细胞碎片应被排除。应尽可能避免使用发射光谱重叠程度较高的某些荧光染料组合(例如,APC 和 PE-Cy5)。各荧光染料都需要补偿对照,并且应包含阳性和阴性细胞群。设置补偿时应单独使用补偿对照。 阳性细胞群的亮度应至少与实验中包含的其他细胞的亮度相当,并
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问
非细胞提取物做wb如何选取内参
天一湖医者
样本的种属来源不同,内参的选择也是不一样的。哺乳动物的样本需要选择哺乳动物中稳定表达的蛋白作为内参;同样的,植物样本需要选择植物中稳定表达的蛋白做内参;
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问
冻存细胞复苏解冻时间问题?
zeemee
37度水浴1-3分钟就可以,千万不要温度太高
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问
WB实验中,电转时出现条带弥散是怎么回事?
天一湖医者
可能是电场不均匀,尝试换转膜设备和缓冲液。
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问
对于难贴壁的心肌细胞,用多聚赖氨酸包被培养皿可以吗?我们一直用的是鼠尾胶原。
bamboopiggy
鼠尾胶原和多聚赖氨酸都可以,直接有促贴壁的作用就行。
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问
凯氏定氮法怎么去除掉非蛋白质氮?
天一湖医者
硫酸铜在碱性溶液中,可将蛋白质沉淀,且不溶于热水,过滤和洗涤后,可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离,再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。 二、仪器设备 (1)烧杯:200mL。 (2)定性滤纸。 (3)其它设备与粗蛋白质测定性相同。 三、试剂及配制 (1) 100g/L硫酸铜溶液:分析纯硫酸铜(CuSO4 5H2O)10g溶于100mL水中。 (2) 25g/L氢氧化钠溶液:将2.5g分析纯氢氧
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问
一般拿到细胞后,应该注意什么?
Eason老歌迷
拿到细胞以后呢,就先不要开盖,放在培养箱里放一段时间,在显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞拍照,观察培养基的颜色,有没有漏液情况,细胞有没有污染 。
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问
纤维素、半纤维素和木质素之间有没有什么含量关系?
天一湖医者
没有什么关系。纤维素(cellulose)是由葡萄糖组成的大分子多糖。不溶于水及一般有机溶剂。是植物细胞壁的主要成分。纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖,占植物界碳含量的50%以上。棉花的纤维素含量接近100%,为天然的最纯纤维素来源。一般木材中,纤维素占40~50%,还有10~30%的半纤维素和20~30%的木质素。 半纤维素(hemicellulose):是由几种不同类型的单糖
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问
贴壁细胞长满了不换瓶会怎样?
沙砾FLY
在动物细胞培养时,用培养瓶培养细胞就有贴壁生长,接触抑制的特点,如果细胞贴壁生长长满整个瓶身,以后细胞将不会再增殖,也不会出现长两层细胞的现象,这个时候就需要更换培养瓶和培养液,否则细胞将停止增殖。癌变的细胞就不会受到这一性质的限制。癌变的细胞贴壁生长长满瓶壁出现接触以后并不会出现抑制现象,还可以无限增殖。意思说,细胞可以长出两层,三层甚至更多层,无限增殖下去,最后就会出现一个肿瘤类的细胞团,一团
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问
请问用一段时间的细胞,怎么检测细胞有没有感染其他组织?有什么试剂盒或者检测方法吗?
n0y0j7
感染其他组织?我觉得实验室同时有几种长的快的癌细胞,会不会某个瓶里两种细胞都有?会相互克制少的被灭了,还是形态各异很好区分能看出来,种属一样的话检测估计不好检测。
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问
请问大家配好的培养基在4℃最多能放多久?如果在60℃水浴了一下午,培养基还能用吗?
未来9
密封灭菌后放置在2-8℃冰箱内可以保存三个月,普通的培养基平板可以保存一个月或更久。60℃水浴了一下午,培养基还可以用的。
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问
L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?
Eason老歌迷
肯定重要,它不仅可以提供能量,而且蛋白质的合成和核酸代谢的也有它的参与。至于说它稳不稳定,其实它并不是一种稳定的氨基酸,在中性水溶液中会自发降解,4℃冰箱内放置2周,大部分谷氨酰胺就没了。
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