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问
如何提高提取RNA纯度,避免提取过程中的酚残留?
bamboopiggy
酚与氯仿均起到变性的作用。酚的变性能力强于氯仿,但酚与水有一定的互溶,因此酚抽后,除可能损失部分核酸外,水相中还会残留酚,而酚的存在将对核酸的酶反应产生强的抑制,因此在操作中可单用氯仿作变性剂、也可用酚/氯仿混合变性,也可用单一酚作变性己,但用单一酚后在有机溶剂沉淀时一定要用氯仿重抽提。
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问
siRNA导入细胞有哪些方法,哪种最好?
bamboopiggy
1取决于你的实验目的,细胞还是动物2.要看你要导入的是什么细胞?贴壁细胞一般,用化学转染,悬浮细胞用电转的多。生殖细胞用显微注射,动物可以用载体导入。
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问
同种组织的两种细胞直接共培养
bamboopiggy
贴壁细胞一般用DMEM高糖,悬浮细胞一般用1640,两种细胞直接共培养的培养基可用DMEM高糖,因为DMEM高糖的营养成分比1640多。培养两种细胞的比例需要你做预实验确定,一般从1:1开始,当然 你可以评估一下它们在组织中的分布比例。
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问
由一个单克隆细胞分裂来的CHO细胞,为什么有的大小不一?如何控制细胞粒径,避免其过大?
dxy_3xid5eh3
单克隆细胞也会随着培养时间的增长确实是会产生一些变化,也会存在细胞个体之间的差异,只是相对pull的细胞来说差异更小。可以通过流式分选的方法进行一定粒径的分选。
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问
Walker 256细胞可以连续传代多少次之后冻存
天一湖医者
原代分离的细胞最好在3代以内,如果是无限传代细胞无所谓。
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问
想问下中间细胞聚团的原因是什么
dxy_90k7dzq
状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差)。
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问
WB跑完用丽春红染色什么都没有?
喵喵喵柏
你在跑之前有没有定量测浓度呢?跑的时候看到了溴酚蓝的颜色不代表真的有蛋白
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问
细胞总是爱叠着长,之前不是这样的,请问是什么原因
bamboopiggy
这个感觉是你胰酶消化没有消化成单细胞,所以才逐渐扎堆生长
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问
细胞无明显污染但是总是飘很多
dxy_ybjer4q9
是不是培养基添加fbs和双抗的量不足导致的我们一般是培养基:fbs:双抗=50:5:1
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问
条件培养基的离心纯化问题
Eason老歌迷
s2结束后,收集培养基上清液,并离心,过滤,即可得到条件培养基
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1775 围观
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问
T3代细胞传代,生长9天细胞突然变黄,显微镜下镜检全都是死细胞,为什么细胞突然死亡?
bamboopiggy
考虑细胞数目是否太多?养的时间太长,导致细胞太拥挤,然后变黄一般就是细胞多了。在除外细胞污染的情况下。
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问
想用荧光显微镜观察病毒感染细胞后的形态,是用普通光学显微镜还是需要荧光显微镜
bamboopiggy
这个要看你的病毒带不带荧光,,如果带荧光,可以用荧光显微镜,顺便还可以看一下转染效率
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问
病毒以MOI为1接种细胞,是不是需要提前测TCID50后再计算病毒接种体积
bamboopiggy
MOI是multiplicity of infection的缩写,中文译为感染复数,一般认为MOI是一个比值,没有单位,其隐含的意思是 pfu number/cell,即病毒颗粒数/细胞数。如果你的pfu/ml值为undefined109(9次方),那么1毫升病毒液中有10的9次方 个病毒颗粒。如果你知道病毒滴度(pfu/ml)的值,那就简单些啦(因为病毒滴度(pfu/ml)的值得出是比较麻烦的),MOI=(p
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问
组织细胞取材后如何稳定
dxy_bz3louvw
应该提前准备好无血清培养基,待组织离体后直接放入培养基,减少等待时间,在培养皿中进一步分离纯化(弃掉多余组织),然后再进行后续操作。
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问
P62跑出来条带淡背景很脏怎么办,我用的是abcam的一抗,1:10000。大佬救救孩子吧
Eason老歌迷
背景脏不一定是因为仪器不干净造成的,也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的。
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问
细胞降脂模型不好建立,诱导分化不了成熟脂肪细胞,脂滴较小是什么原因
Eason老歌迷
诱导剂一定要选好,不能用甲醇固定,因为甲醇为脂溶剂,可以用4%多聚甲醛水溶液固定既可。而且吧染色之后不能脱水,甘油明胶封片。
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问
细胞为何生长不均匀?
Keven轩
可能是在细胞放入培养箱之前没有进行八字摇匀,导致细胞在培养皿中分散不均
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问
如何计算细胞培养密度
Keven轩
可以取一定量含有细胞的重悬液进行梯度稀释后上C6流式器进行计数
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问
如何预防细胞培养中黑点的产生?
Keven轩
使用质量较好的胎牛血清,并且加入细胞培养时向培养液中加入抗生素防止污染
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问
WB一直跑不出条带咋办
doczp1
先测一下浓度是不是太低啦?还有就是没有表达出来蛋白
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