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PCR求助
bamboopiggy
你这不是正常的melt curve,数据不能用了。找一下原因,是试剂还是机器的原因。
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问
UCSC验证别人已发表文献的引物出现no match,什么原因?
bamboopiggy
是不是方向问题?有的软件要求reverse方向的引物要反向互补才能对比上
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问
讨论:这些不完全透亮的是死细胞吗?
秋秋欣欣
细胞是具有通透性的,这些发亮的不具有通透性的细胞是死细胞
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问
###大鼠肝移植
秋秋欣欣
门静脉套管和下腔静脉套管比较合适。
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问
THP-1诱导后消化
汤姆卜丽波
试试用胰酶加0.3-0.5%的EDTA,消化个七八分钟,拍一拍
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问
Taqman探针怎么设计?荧光基团怎么选择 ?
未来9
探针设计的基本原则:1. 保守:探针要绝对的保守,有时分型就单独依靠探针来决定。理论上有一个碱基不配对,就可能检测不出来。若找不到完全保守的片段,也只能选取有一个碱基不同的片段。且这个不同的碱基最好在探针的中间,对探针与目的片段的杂交影响不大,不相同的碱基最好不要在两端,因为两端不利于探针的杂交。且最好为A或T,而不能为G或A,因为A、T为双键,而G、A为三键。2. 探针长度Taqman探针的长度
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问
Meta分析数据处理的时候,遇到数据异质性怎么处理?
whilt-shirt
出现异质性需要对每个文献进行分析,找到异质性的原因,使其同质化
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问
解靶基因序列检索以及常用引物设计原则是什么?
秋秋欣欣
引物设计的原则是:1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。2、引物长度一般在15-30碱基之间。3、引物GC含量在40%-60%之间,Tm值最好接近72℃。4、引物3′端要避开密码子的第3位。5、引物3′端不能选择A,最好选择T。6、碱基要随机分布。7、引物自身及引物之间不应存在互补序列。8、引物5′端和中间△G值应该相对较高,而3′端△G值较低。9、引物的5′端可以修饰,而3′端不可修饰。1
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问
想请教各位hela细胞是黑胶虫还是支原体污染呢?
天一湖医者
按你说的,应该是黑胶虫污染,一般支原体不容易看出,
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问
弱弱的问一句,所以文献中经常看到的qRT-PCR就是Real-time RT-PCR(RT-qPCR)吗?
whilt-shirt
是的,qRT-PCR就是Real-time RT-PCR
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问
能同时改变两个变量做cck8吗?
天一湖医者
可以的,可以同时改变两个变量做cck8。
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问
新手co-ip相关实验遇到的三个问题。希望能得到大佬的帮忙,万分感谢
汤姆卜丽波
input出不来可能是试剂准备上就有问题,也有可能蛋白不表达,而位置不同可能是收到了重链的干扰。避免干扰可以使用IPkine二抗,增加Input和IP泳道上样量,减少曝光时间,以及阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。
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问
请问普通PCR一般退火温度大致在多少范围?是否可根据实际情况微调?
bamboopiggy
退火温度以55度为起始,一般是primer的low temperature-5,要是不低于55,就可以用
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1887 围观
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问
酶切实验中如何避免假阳性
dxy_g9y5gije
首先,多做几个重复,这样容易发现是否出现假阳性其次设置对照,未酶切片段和酶切片段同时跑胶,应当存在明显差异
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问
求助:响应面分析方法实际值与预测值之间的差异如何理解?怎么设计试验减少二者差异?
秋秋欣欣
响应面分析方法是利用实验设计、建模等寻找最优的最优值,与实际值之间肯定存在着一定的差异。要减少二者差异就需要确定最优条件,寻找最优区域。
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问
请问进行乳腺细胞添加单一氨基酸试验时,细胞培养时间怎么确定?什么时候收集细胞?
汤姆卜丽波
可以做一个预实验,按照细胞密度梯度添加,还要区分状态,时间不准确,准确的细胞密度和状态,找到最适値
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353 围观
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问
用作靶向集团的抗体怎么选择啊?救救孩子
秋秋欣欣
最好是单克隆抗体,然后能与靶标特异性的结合。
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457 围观
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问
水稻OsMAPKKKK基因预测定位在核
秋秋欣欣
杂交定位一下看具体是在哪个位置
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问
细胞内硝酸根离子的原位显示
大草原的小灰驴
有细胞的硝酸银染色法,反应过程需要在避光条件,染色之后直接镜检或者瑞氏染色法复染后镜检。细胞内的核仁组织区染成黑色。
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问
组织冷冻之后想做流式有些疑问?
镜泽BioLab
做不了流式,流式是活细胞染色。病理染色也不能做,细胞内的水分形成冰晶破坏细胞形态。只能做WB和PCR
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