实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问PCR求助

bamboopiggy

你这不是正常的melt curve，数据不能用了。找一下原因，是试剂还是机器的原因。

4 回答359 围观

问UCSC验证别人已发表文献的引物出现no match，什么原因？

bamboopiggy

是不是方向问题？有的软件要求reverse方向的引物要反向互补才能对比上

3 回答508 围观

问讨论：这些不完全透亮的是死细胞吗？

秋秋欣欣

细胞是具有通透性的，这些发亮的不具有通透性的细胞是死细胞

4 回答552 围观

问###大鼠肝移植

秋秋欣欣

门静脉套管和下腔静脉套管比较合适。

1 回答373 围观

问THP-1诱导后消化

汤姆卜丽波

试试用胰酶加0.3-0.5%的EDTA，消化个七八分钟，拍一拍

3 回答1926 围观

问Taqman探针怎么设计？荧光基团怎么选择？

未来9

探针设计的基本原则：1．保守：探针要绝对的保守，有时分型就单独依靠探针来决定。理论上有一个碱基不配对，就可能检测不出来。若找不到完全保守的片段，也只能选取有一个碱基不同的片段。且这个不同的碱基最好在探针的中间，对探针与目的片段的杂交影响不大，不相同的碱基最好不要在两端，因为两端不利于探针的杂交。且最好为A或T，而不能为G或A，因为A、T为双键，而G、A为三键。2．探针长度Taqman探针的长度

4 回答1535 围观

问Meta分析数据处理的时候，遇到数据异质性怎么处理？

whilt-shirt

出现异质性需要对每个文献进行分析，找到异质性的原因，使其同质化

3 回答841 围观

问解靶基因序列检索以及常用引物设计原则是什么？

秋秋欣欣

引物设计的原则是：1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。2、引物长度一般在15-30碱基之间。3、引物GC含量在40%-60%之间，Tm值最好接近72℃。4、引物3′端要避开密码子的第3位。5、引物3′端不能选择A，最好选择T。6、碱基要随机分布。7、引物自身及引物之间不应存在互补序列。8、引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。9、引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。1

3 回答572 围观

问想请教各位hela细胞是黑胶虫还是支原体污染呢？

天一湖医者

按你说的，应该是黑胶虫污染，一般支原体不容易看出，

3 回答491 围观

问弱弱的问一句，所以文献中经常看到的qRT-PCR就是Real-time RT-PCR（RT-qPCR）吗？

whilt-shirt

是的，qRT-PCR就是Real-time RT-PCR

4 回答7508 围观

问能同时改变两个变量做cck8吗？

天一湖医者

可以的，可以同时改变两个变量做cck8。

4 回答245 围观

问新手co-ip相关实验遇到的三个问题。希望能得到大佬的帮忙，万分感谢

汤姆卜丽波

input出不来可能是试剂准备上就有问题，也有可能蛋白不表达，而位置不同可能是收到了重链的干扰。避免干扰可以使用IPkine二抗，增加Input和IP泳道上样量，减少曝光时间，以及阴性对照IgG使用量建议调整到1ug以下。

3 回答250 围观

问请问普通PCR一般退火温度大致在多少范围？是否可根据实际情况微调？

bamboopiggy

退火温度以55度为起始，一般是primer的low temperature-5,要是不低于55，就可以用

4 回答1606 围观

问求助：响应面分析方法实际值与预测值之间的差异如何理解？怎么设计试验减少二者差异？

秋秋欣欣

响应面分析方法是利用实验设计、建模等寻找最优的最优值，与实际值之间肯定存在着一定的差异。要减少二者差异就需要确定最优条件，寻找最优区域。

2 回答2259 围观

问请问进行乳腺细胞添加单一氨基酸试验时，细胞培养时间怎么确定？什么时候收集细胞？

汤姆卜丽波

可以做一个预实验，按照细胞密度梯度添加，还要区分状态，时间不准确，准确的细胞密度和状态，找到最适値

3 回答282 围观

问请问有人遇到HUVEC细胞培养出现黑色团块这种情况吗？

一程山路

谢谢，您的意见。原代(ECM培养基)和细胞株(1640)的HUVEC都在养，发现都有黑色团块，请问可能是什么污染呢？

3 回答723 围观

问用作靶向集团的抗体怎么选择啊？救救孩子

秋秋欣欣

最好是单克隆抗体，然后能与靶标特异性的结合。

2 回答337 围观

问跑了两次wb，两次第4，5，6泳道都出现不同程度的扭曲和模糊，这是怎么回事啊？

balalaLy

1:胶的问题，可能玻璃板不行2:蛋白样品的问题，调整一下上样的位置，看看这三个样在其它位置会不会也是这样

5 回答329 围观

问水稻OsMAPKKKK基因预测定位在核

秋秋欣欣

杂交定位一下看具体是在哪个位置

2 回答432 围观

问细胞内硝酸根离子的原位显示

大草原的小灰驴

有细胞的硝酸银染色法，反应过程需要在避光条件，染色之后直接镜检或者瑞氏染色法复染后镜检。细胞内的核仁组织区染成黑色。

3 回答464 围观

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