实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问WB转膜时间与分子量及胶厚度的关系?

bamboopiggy

蛋白分子量越大，胶越厚，转膜时间越长

4 回答2382 围观

问Western Blot实验40V转膜12小时,时间太长了?有什么影响吗?

bamboopiggy

转膜一般是恒流300/400mA，然后1-2个h就可以。如果您的电流是低的，转12个小时也没有问题。

4 回答1272 围观

问wb实验，出的条带是这样的，该怎么改善，

bamboopiggy

下面这条带ok，上面那条带，建议切宽点，然后抗体浓度加大一倍

3 回答276 围观

问wb实验，应什么软件可以分析不同蛋白的表达情况?

balalaLy

一般用imageJ软件，直接网络搜索，有非安装版，非常好用

4 回答793 围观

问做蛋白半定量怎么能标定的一致？

bamboopiggy

用内参，内参一般用的是管家基因，但是不同的处理，可能需要选择不同的内参

4 回答283 围观

问在跑wb的时候，条带都连到一起变成一条线是怎么回事？

bamboopiggy

孔太密了，上样量太大了，导致感觉连到一起了

7 回答1717 围观

问wb实验过程，想分析蛋白蛋白的表达情况，上样体积是否一致?

balalaLy

上样体积要求尽量一致，是为了保证每个孔在跑的过程中压力一致。不然隔壁孔的蛋白会往旁边体积少的地方歪。

4 回答1972 围观

问请问WB条带出现中间部分空白是什么原因？是转膜导致的吗？

balalaLy

如果是圆的那种空白就是转膜的时候有气泡。

5 回答1364 围观

问质粒转染，PEI的用量与细胞数有关，还是与质粒数有关？PEI的量不能超过多少？

bamboopiggy

和质粒的量有关，和细胞的数目也有关，一般细胞融合度到50%-60%开始做转染，按照不同的比例如1：2-1:8的比例来配转染试剂。

5 回答5830 围观

问如果蛋白部分发生磷酸化使用普通的一抗所呈现的蛋白条带包含磷酸化后的蛋白吗？

bamboopiggy

您所谓的普通抗体是指的total的抗体吧？total抗体包含所有的修饰后的蛋白和未修饰的蛋白。

4 回答652 围观

问做WB实验时一侧条带比另一侧条带浅是什么原因？

bamboopiggy

转膜没转好，三明治夹心的夹子可能变形了，或者是抗体加的不匀，

7 回答1727 围观

问有没有用过磁珠分选大鼠脑原代细胞

天一湖医者

磁珠分选大鼠脑原代细胞的初步研究。

4 回答375 围观

问样品-80度保存，7天前做过条带有前天再做条带很模糊，怀疑一抗失效把显过影的这张膜敷了一次新配的一抗还模糊一直用预制胶。为啥

balalaLy

虽说反复冻融蛋白会降解，但经验证明冻融个4，5次是没有多少影响的。所以你的这个应该不是样品的问题，抗体和预制胶的问题比较大。预制胶虽然是商品化的，但是也不是万无一失的。要敢于质疑

4 回答408 围观

问质粒导入载体失败咋办？

天一湖医者

排查问题的话，先查酶有没有问题（连接酶连别的片段和载体试试看，还有酶切产物纯化后直接转化看长多少菌落来判断酶切是否成功），然后插入片段可以用TA克隆去测序看是不是PCR成功。

4 回答421 围观

问该怎么设计实验呢？

天一湖医者

如果A不是基因表达产物，只是外源物质，可以通过时间和剂量效应实验证实A对B的直接调控，如果A调控B具有时间依赖性和剂量依赖性，则A调控B表达结论成立。

5 回答542 围观

问求助：皮肤组织提RNA，难以研磨

dxy_gwrp7ndq

可以组织样品液氮研磨成粉末状，在液氮基本挥发完时，直接在研钵中加 Trizol 试剂继续研磨，由于 Trizol 试剂中含有强烈的 RNA 酶抑制剂，组织样品和 Trizol 充分研磨混匀后能有效抑制 RNA 的降解；再将混合物转移到玻璃匀浆器中进一步匀浆，能使组织中的 RNA 充分释放出来，提高 RNA 产量。在将实验室温度控制在25℃以下的条件下，操作过程尽量在冰盒上操作，避免温度升高加速 R

5 回答2779 围观

问细胞迁移侵袭实验求助

bamboopiggy

侵袭和迁移的细胞一般铺的多少就不一样，这两者之间没有可比性。只要你的实验组和对照组有差别就可以。

3 回答631 围观

问溶解曲线异常

Eason老歌迷

可能有几个原因。主峰前面出峰的话，是引物二聚体，而如果主峰后面出峰的话，一般的是非特异性的大片段的扩增。改变引物浓度，退火温度和镁离子浓度试一试。

4 回答719 围观

问请问刚收到的冻存细胞已完全融化，运输箱内干冰已全部挥发，此时将细胞放入-80保存，第二天进行复苏，细胞还能活吗？

府宅

对于干冰运输的冻存细胞，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养，切勿再次低温冻存，再冻存细胞大概率不能活

5 回答643 围观

问重组蛋白用于体外细胞培养时内毒素标准相关问题

JCorona

1.内毒素对细胞是有影响的，尤其是免疫相关的细胞，例如RAW264.7；2.一般推荐内毒素的浓度低于5EU/mL

17 回答3851 围观

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