实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问WB两张膜，为什么差别这么大

天一湖医者

可能是操作过程中有问题（可能原因是（1）、你结合底物会不会有问题，即没有充分结合好，或者结合时间太短，（2）、你要确定两张膜都是用新的底物反应液，（3）、就是没有信号的膜会不会压片时间太短，如果使用仪器扫片就不存在这种问题，）所以原因比较多，你只能逐一排查。

4 回答601 围观

问Southern Blot电转法

天一湖医者

操作方法 1. 在琼脂糖凝胶上电泳分离DNA。取出凝胶，切去边缘多于部分，EB染色，在紫外灯下照相（放一标尺，可从像片中读出DNA迁移的距离）。 2. 将凝胶置于200mL变性液中，浸泡45分钟，并温和地不断振荡，使凝胶上的ds-DNA转变为ss-DNA，然后用重蒸水冲洗凝胶几次。 3. 用中和液浸泡凝胶并不断地振荡45分钟，将凝胶中和至中性。防止凝胶的碱性破坏硝酸纤维膜。 4. 取一个瓷盘，在底

1 回答795 围观

问滑膜组织取材

天一湖医者

大鼠膝关节滑膜组织的图片，是需要这样的吗？

1 回答896 围观

问求助：裸鼠长毛以及皮肤角质增厚

bamboopiggy

你买的裸鼠状态确实不好了，可能这家公司的裸鼠都这样，你最好换一家公司订。

1 回答842 围观

问低温条件下，nadh验证酶活时，340nm的nadh吸光值先下降再上升是为什么？

天一湖医者

在波长为340nm处随着NADH的氧化， NADH吸光度下降。

1 回答796 围观

问请问大佬们有没有遇到过质粒转入293t中表达，但目的细胞不表达的情况？

bamboopiggy

1.用慢病毒感染293T再是一下，如果还有表达那只能说明你的目的细胞对这套系统不合适。2.可能你的细胞本身对这个筛选的抗生素抵抗，所以你筛不到目的细胞，导致wb显不出来。

3 回答1392 围观

问转膜液的配方中加甲醇的作用是什么？

Eason老歌迷

有几个原因，一个是可以降低电导，减少转膜时候的发热。二甲醇可以使sds和蛋白分离。

3 回答3346 围观

问即使两次的上样量相同，但是内参却不一样，是为什么？上样过程都是一样的

bamboopiggy

其实你觉得你上的一样，还是有误差的，只要趋势一致，或者是比值差不多就可以了。当然还有一种情况就是蛋白降解了。

3 回答364 围观

问细胞传代最多可以传多少代？

府宅

一个人的一个细胞分裂次数有限，大约50到60次左右在动物细胞体外培养过程中细胞在培养到40-50代时，细胞的分裂速度会明显减缓，甚至完全停止。

4 回答7647 围观

问细胞为什么会出现老化现象

dxy_gwrp7ndq

1. 不要等细胞长得太满才传代。细胞太密会导致细胞状态下降，产生细胞接触性抑制。2. 细胞不要消化过度。采用胰蛋白酶消化细胞，会造成细胞表面一定程度的细胞损伤。3. 最重要的是使用优质的血清和培养基

4 回答598 围观

问SDS-PAGE出现异常条带，比如微笑现象，拖尾现象，文理现象，条带粗等是什么原因？怎样可以避免？

府宅

纹理现象：可能是由于样本中不溶性颗粒引起的。建议：加样前离心；加适量样品促溶剂。拖尾现象：主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。

6 回答3988 围观

问求助 Collagenase A 是几型胶原酶？

府宅

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，是按照胶原酶消化的组织类型分类的，应该是属于单一成分。A、B、D、P、H型，是按照罗氏胶原酶产品分类的，应该是属于混合成分。

4 回答4876 围观

问想做双酶切，出来的条带很浅，请问质粒浓度达到多少酶切的效果比较好？

天一湖医者

质粒浓度一般以μg/ml来计算，一般双酶切使用质粒的量为20μl使用1μg左右质粒。

2 回答4844 围观

问WB结果中可能出现有目标蛋白条带，但是目标条带在膜上颜色较浅，请问这是什么原因呀？

天一湖医者

转膜不充分规范转膜的操作；优化电转条件；可将两张膜叠加在一起，防止转膜过度，或使用小孔径膜洗膜过度洗膜时间不宜过长，加入的去垢剂不宜过强或过多，减少洗膜次数，洗膜时间和温度封闭过度减少封闭时间，试用不同的封闭液曝光时间过短延长曝光时间，如使用化学发光成像系统，可调整显示灰度值抗体染色不充分延长孵育时间或增加抗体浓度抗体问题抗体浓度低增加抗体浓度抗体和抗原亲和力不足增加抗体浓度抗体活

7 回答184 围观

问大鼠踝关节滑膜怎么取？

ZIWENHUA

将大鼠浸泡于10 %强力消毒冷溶液中10 分钟, 在超净工作台, 仰位固定,常规碘酒、酒精消毒术野。沿膝关节正中纵行切开皮肤直至暴露出以膝关节为中心约3cm ×3cm 的区域, 以有齿镊提起髌骨。沿髌骨上缘约013 ～014cm 处向下切割直至股骨, 再分别沿髌骨两侧向下分离至胫骨, 此时即打开了膝关节腔, 可见由髌骨下缘向上延缓有一层平滑光亮呈淡黄色的滑膜组织。完整剥离滑膜组织, 最后以眼科镊轻

2 回答3763 围观

问求助：AHRQ横断面研究质量评价条目解读

天一湖医者

Meta分析系列之四：观察性研究的质量评价工具》中找到了翻译的版本：1是否明确了资料的来源（调查，文献回顾）2是否列出了暴露组和非暴露组（病例和对照）的纳入及排除标准或参考以往的出版物？3是否给出了鉴别患者的时间阶段？4如果不是人群来源的话，研究对象是否连续？5评价者的主观因素是否掩盖了研究对象其他方面情况？6描述了任何为保证质量而进行的评估（如对主要结局指标的检测/再检测）7解释了排除分析的任何

1 回答3678 围观

问WB条带的背景

秋秋欣欣

可能是你没封闭后，一抗可以用奶粉直接稀释抗体，洗膜的时候可以多洗几次，水换勤一些

5 回答403 围观

问养细胞求助

dxy_gwrp7ndq

很可能是黑胶虫，这也没什么特别好的方法。

3 回答268 围观

问rip对照实验的设计

天雨心晴

敲低，原始，和空载三个都要做。

3 回答564 围观

问结直肠癌转染

秋秋欣欣

220-300V都可以，或者就用脂质体转染

2 回答328 围观

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