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        QT-PCR实验技术操作中的数据误差分析？

        相关实验：实时荧光定量 PCR（realtime PCR）

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        揽星辰0414

        某位研究生在研究A基因功能时，首先将A基因的过表达重组质粒转染HEK293细胞，然后利用QRT-PCR鉴定过表达效率，发现过表达组A基因的Ct值与内参的Ct值都在18左右，而对照组A基因Ct值在25左右，内参在19左右;之后其又将这个质粒转染于HT22细胞中，同样利用QRT-PCR检测过表达，却发现过表达组A基因的Ct值在19左右，而内参的Ct值为40，对照组的A基因及内参的Ct值也都在41左右，请分析其原因?

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        4 个回答

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        Eason老歌迷

        有帮助

        个人感觉，是不是你的pcr操作的问题

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        在每个细胞中提RNA逆转录的时候都把浓度调一致

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        天一湖医者

        有帮助

        不是因为内参在不同组织里表达是有差异的，而是你的加样量有差异，你能确定两组实验加进去的样本DNA含量一模一样么？退一万步讲，即便是肿瘤和癌旁的内参CT不同也不会影响最后的定量。原因的话，你再研究一下相对定量的资料。

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        bamboopiggy

        有帮助

        只能说明在HT22细胞中，选的内参基因不能用，换一个试试

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        求助，内参基因(gapdh)CT值在15-18，目的基因的CT值比内参基因小大概14-16，这个引物还能用吗，还是怎么处理解决

        8 回答 12710 围观
        2023-01-31

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