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        QT-PCR实验技术操作中的数据误差分析?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        揽星辰0414

        某位研究生在研究A基因功能时,首先将A基因的过表达重组质粒转染HEK293细胞,然后利用QRT-PCR鉴定过表达效率,发现过表达组A基因的Ct值与内参的Ct值都在18左右,而对照组A基因Ct值在25左右,内参在19左右;之后其又将这个质粒转染于HT22细胞中,同样利用QRT-PCR检测过表达,却发现过表达组A基因的Ct值在19左右,而内参的Ct值为40,对照组的A基因及内参的Ct值也都在41左右,请分析其原因?

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        4 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        个人感觉,是不是你的pcr操作的问题

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        在每个细胞中提RNA逆转录的时候都把浓度调一致

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        天一湖医者

        有帮助

        不是因为内参在不同组织里表达是有差异的,而是你的加样量有差异,你能确定两组实验加进去的样本DNA含量一模一样么?退一万步讲,即便是肿瘤和癌旁的内参CT不同也不会影响最后的定量。原因的话,你再研究一下相对定量的资料。

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        bamboopiggy

        有帮助

        只能说明在HT22细胞中,选的内参基因不能用,换一个试试

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