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        wb黑糊糊一片,是怎么回事呀?湿转,300mA 100min,分子量110kD左右。

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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        虎里猴气的猪

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        12 个回答

        user-title

        秋秋欣欣

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        除了封闭外,发光液配置时间过长同样会引起发光效果不好,背景脏或者漆黑一片。

        user-title

        恩N4VZ

        有帮助

        从我个人做wb的经验来说,黑乎乎的潜在原因有1)封闭液封闭一步不够充分。2)洗膜液污染。3)一抗或者二抗的抗原抗体结合的特异性低,可能抗体过期导致。

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        这种情况有可能是封闭不完全,也有可能是没转上,建议转膜后用丽春红和考马斯蓝染一下看看

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        Eason老歌迷

        有帮助

        没有图啊!要么是你封闭的问题,要么就是你孵抗体的问题,现在夏天了孵二抗时间短一点。

        user-title

        mmmedstu

        有帮助

        有没有可能是因为蛋白分子量太大,没转过去?

        user-title

        Guoood

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        1. 黑糊糊可能是没有封闭好,配制5%的脱脂奶粉封闭,时间1小时以上最好
        2. 也可能是抗体浓度过高,可以稀释一下抗体
        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        可能是你的抗体坏了,别的条带呢?别的条带也黑么?

        user-title

        dxy_nkqusvl2

        有帮助

        封闭时间再长点,或者抗体特异性不够

        user-title

        yanlai000

        有帮助

        用快速封闭液试试,QuickBlock™ Western封闭液

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        可能浓缩的效果都不是很好,浓缩胶浓度、长度等可以调一下,另外上样量可以少一点。

        user-title

        balalaLy

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        110的蛋白100min 300ma是不够的,起码要2个半小时往上,但是黑乎乎一片应该不是仅仅是转膜的问题,100min至少有一部分是转过去了的,所以,抗体的问题比较大

        user-title

        ZIWENHUA

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        出现黑点和黑斑,原因:膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合,解决办法:封闭牛奶一定要纯,封闭结束之后要洗,我们常常是等到要封闭的时候发现没有牛奶,然后匆匆忙忙用PBST/TBST配置,配的匆忙的时候往往不管是否已经完全溶解。

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