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问
重组质粒双酶切后看不到目的片段,上面那个载体一万多bp,底下这个载体5000多bp,怎么回事?
Eason老歌迷
连接产物酶切后跑胶没见目的片段可能是目的片段量比较少,没有电泳检测不出,挑菌提质粒后有没有目的片段可以用PCR检测一下。
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问
进行RT-PCR需要将样本RNA浓度调成一致再进行接下来的实验吗?
Eason老歌迷
最好是把浓度统一一下。RT-PCR的目的是看目的基因在不同样品中的表达量。因此,比较的前体必须是所有样品的总RNA量必须相同或接近相同,通常的做法是用内参基因的表达近似得来反应总RNA的量。
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问
多西环素和恩诺沙星在细菌中的工作浓度是多少呀?我用1ug/ml的浓度都不长菌
Eason老歌迷
要是1ug/ml的浓度,都不长菌,那你可以稀释一下看看。
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问
染料法对DNA含量绝对定量
Eason老歌迷
这个A260/280其实就是用来测dna纯度的。用紫外分光光度计测量样品时,不同成分的样品会有不同的吸光度。260纳米(nm)是核酸的最高吸收峰的吸收波长,280nm则是蛋白和酚类的。一般用A260/A280来检验DNA和RNA的纯度,纯DNA的这个比值约为1.8,纯RNA约为2.0.。所以说如果你的dna不纯 你可以先测,然后比对数值,然后纯化。
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问
小鼠足细胞培养
天一湖医者
推荐iCell-0001培养基;
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问
碱性磷酸酶ALP单位换算
天一湖医者
g=1000mg prot l=1000ml g/l=mgprot/ml g/l=mgprot/ml prot是protein的简写。1卡门氏单位=0.482U
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问
IHC染色
balalaLy
第二个的染色太深了,可以调低一点浓度
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问
求助:生物钟研究中的(ZT12—ZT16)是什么意思,感谢大佬的指点
天一湖医者
一般是指昼夜节律的时间点,在不同时间段的指标
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问
如下图,跑的一个转录因子hes5,没有溶解温度,溶解曲线也不正常,求分析原因。用的条件附上了,提问者其他分子均跑出,技术比较稳定
汤姆卜丽波
这就是引物不对啊,你是不是用错了引物或者引物降解失效了
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问
图里显示的是我在NCBI上寻找的一个蛋白序列的资料页面截图,请问这里的相关文献怎么查找啊?按照图里的信息找不到
Eason老歌迷
打开NCBI主页;左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称;在出来的所有条目第一行后面都有种属表明,比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属;再出现的页面中找到那个像数轴的图,在左侧有可以点击的蓝色数字,往往开头有AK、NM的开头,点击它,再出现的下拉框里选择GENEBANK;最下面就是他的基因序列 当然也可以参考页面上提供的CDS区
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问
细胞实验,对细胞的代数有要求吗?不涉及到基因芯片之类的实验,只是简单的做一下不同处理下目标蛋白的含量差异。
whilt-shirt
一般要求第3代到第10代之间,这期间细胞的状态比较稳定
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问
用培养法的话应该选什么菌,依据是什么?
Eason老歌迷
我的观点是可以加氨卞西林和四环素。你可能还没搞清楚为什么要加特定抗生素。加入特定抗生素是为了防止杂菌生长。一般生物工程细菌都会带有特定的抗药性,借由加入这个特定的抗生素,就能让经过我们挑选的生物工程细菌在培养基上生长,而其他不带有抗药性的杂菌无法生长,从而避免杂菌污染。
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问
涂板长了两层菌
Eason老歌迷
是不是你的抗生素失效了,我觉得根据你的情况这种可能性很大,倒平板培养基时一定要保证至少50度以下,否则弄不好抗生素就失效。
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问
禽流感病毒rt pcr产物跑胶
汤姆卜丽波
你的rtpcr是正常的?但是跑条带跑不出来?是不是表达量不高,这样也跑不出来。
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问
A549转染后形态改变 活性也不太对
balalaLy
加完病毒液之后多久换液?建议早点换液,一般看细胞的状态,状态不好20小时左右就得换液了。
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问
电转化质粒浓度
balalaLy
质粒浓度一般100ng/ul左右,1:25的体积比例加到感受态中
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问
硅藻缺硅同步化处理为什么做不出来?
汤姆卜丽波
实验条件不一样。有可能他做得出来你做不出来。把时间和作用浓度再摸索一下
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问
各个器官细胞,有什么独特的表面标志物,可以用抗体靶向?
Eason老歌迷
这个要是细讲起来就复杂了,我就拿几个常见的来举例吧,肝细胞癌的特异性标志物是AFP也就是甲胎蛋白。这些都是可以查到的,你用哪个细胞,你就去网上查一下文献就有。
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问
能不能用酪蛋白ELISA试剂盒检测后,实现对细胞的鉴定而不提取RNA做PCR?
汤姆卜丽波
那你还得提蛋白。。。而且有其他蛋白质存在,ELISA的准确率大大降低
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问
生物组织的消解方法,ICP-MS测主微量
汤姆卜丽波
一般是经恒温干燥后,采用硝酸-过氧化氢体系微波消解
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