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问
请问大家,这个质粒图谱的平行箭头表示什么?为什么会有两个平行箭头?为什么箭头有反向?
Eason老歌迷
质粒上有多个基因,基因的方向不一样,所以就有不一样的箭头方向。如果一个图谱上有两个方向,可能是有两个启动子。
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问
跑WB时,浓缩胶太长会导致条带连在一起或模糊一片吗?
秋秋欣欣
胶连成一片不是浓缩胶太长的原因,多半是因为样品里盐容量含量太高,被拉着往两边跑
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问
分子伴侣共表达的蛋白纯化
Eason老歌迷
通常机器用线性方法洗脱蛋白这样方法有的时候并不能得到好的纯化效果,可选择不同浓度的咪唑做阶段洗脱,此外可用盐酸胍代替尿素试一试。
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问
WB组蛋白H3K27
Eason老歌迷
我也遇到过这种情况,一个是你用的maker是不是准确,我有一次用的新maker,它就不准。二是你杂带很多,那就说明可能是你封闭没做好,或者是选的抗体特异性不高。
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问
急求如何筛选与病毒感染相关的细胞因子风暴相关宿主蛋白,谢谢各位大佬!
Eason老歌迷
具体参看这篇文章。作者用高通量筛选鉴定SARS-CoV-2感染必须基因研究者使用人的GeCKOv2文库病毒(~0.2 MOI)感染A549ACE2细胞,嘌呤霉素药筛9天,随后0.3和0.01 MOI SARS-CoV-2分别感染巴细胞,感染24h检测核衣壳(N)蛋白表达,感染6天后存活的细胞被提取DNA用于高通量测序。用3种方法(Robust rankaggregation,RIGER weigh
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问
为什么我跑内参总是出现两个上下相同且平行的条带?
whilt-shirt
这是出现了杂带,有可能是抗体浓度过高,建议增加内参一抗的稀释比例
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问
关于突变信号肽序列研究的相关问题
Eason老歌迷
肯定是不能的。信号肽位于分泌蛋白的N端。一般由15~30个氨基酸组成。包括三个区:一个带正电的N末端,称为碱性氨基末端。一个中间疏水序列.以中性氨基酸为主,能够形成一段d螺旋结构,它是信号肽的主要功能区。一个较长的带负电荷的C末端,含小分子氨基酸,是信号序列切割位点.也称加工区。一般使用定点突变。
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问
内参的条带出现深浅不一的话,需要调上样量把他们调的差不多嘛?
whilt-shirt
是的,如果内参不齐审稿人会对你的数据产生质疑
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问
WB显影时内参蛋白有条带,但是目标蛋白没有,显示信号弱出不来条带,有什么解决的办法吗?之前显出来过一次,还是同样的条件就不行了
whilt-shirt
增加目的蛋白一抗浓度或者换用1.5mm的胶增加上样量试试
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问
为什么移液枪枪头里总是残留一点液体?
Eason老歌迷
你操作的时候不要太快。吸液、出液操作都要缓慢,这样就不会有残留了。或者是也有可能是你的枪头质量有问题。
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问
免疫组化检测肿瘤组织CD4+T细胞和CD8+T细胞比例,用CD4单抗和CD8单抗作一抗标记就可以了吗
balalaLy
双阳是细胞怎么区分?可能选其它的Marker会好一点或者用荧光双染
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问
EMSA求教!!!
天一湖医者
EMSA实验需要设置许多组对照实验。EMSA非放射性探针设计要注意:(1)防止错位配对、封闭成环,排除目标序列以外结合位点的(2)防止产生空间位阻(3)注意AT/GC比例(4)EMSA探针不宜太长,一般是几十碱基对。太长会产生过多结合位点导致结果分析困难,还会产生超级螺旋结构而掩盖结合部位。(5)建议采用Biotin或红外荧光标记,尽量不要采用DIG标记。,探针两端都有标记以提高灵敏度
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问
WB煮蛋白的温度和时间
balalaLy
5-10min,95-100度,这个范围内都可以
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问
image j 与 image lab
Eason老歌迷
image lab是官方版,需要你自己去找一些小插件。而image j功能更多,然后它自带了很多小插件,不用你自己去网上下载。我个人更喜欢用image j,然后教程你可以去网上自己搜一下。
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问
紧急求助
天一湖医者
基因和自杀质粒连接不上,一般是因为限制酶的识别位点大多是反向对称的,如果只用用同种酶切,所得片段的2端序列相同,在连接时,是随机连接,不仅会出现反向连接,而且会出现片段串联。
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科研问题请教
秋秋欣欣
产品纯化后,任意一种酶都可以自动在后面加a
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IHC肠组织石蜡切片染色背景过高
秋秋欣欣
背景高可能是一抗或者二抗孵育的时间太长
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问
小胶质细胞
天一湖医者
这个目前个人觉得最有效的分离方法,目标:小胶质细胞(microglia)材料:长到已经融合的小鼠脑胶质细胞混和培养(mixed glial culture)Trypsin-EDTA solution (2.5% trypsin, 1 mM EDTA in HBSS; 25200-072)Dulbecco’s modified Eagle medium-F-12 nutrient mixture (
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问
【求助】急!大鼠阿霉素肾病模型24小时尿怎么处理送检
whilt-shirt
你要是送检验科直接送过去就行,如果是自己用试剂盒检测就要离心,检测上清中的成分
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问
培养瓶放回培养箱前喷酒精对细胞生长影响大吗?
yanlai000
和我们实验室相同的操作😂 ,建议还是少喷一点,时间长了还是有一定影响
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