丁香通
丁香园
论坛
医药招聘
丁香医生
更多
调查派
用药助手
丁香搜索
医药数据库
来问医生
我要登录
|
免费注册
|
我的丁香通
企业机构:
成为企业机构
个人用户:
个人中心
移动端
搜实验
大家都在搜
大家都在搜
0 人通过求购买到了急需的产品
免费发布求购
搜索
发布求购
实验专区
实验库(10000+)
实验问答
实验专题
热门视频
前沿资讯
科研者之家
丁香通
>
实验专区
>
实验问答
>
全部
实验问答
25,357,761 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
蛋白出现“笑脸”和“哭脸”条带的原因是为什么!
Eason老歌迷
出现笑脸哭脸的很大概率就是你制胶的时候没混匀。或者是电泳温度高了。
3 回答
1005 围观
3 回答
1005 围观
去回答
问
从超声纯化的蛋白怎么保存,可以放在负二十吗,可以放多久,如果制成wb的上样品,需要怎么保存?
天一湖医者
可以。1. 短期保存(24 小时内)大多数的蛋白质可以保存在 4°C。2. 在 4°C 超过 24 小时 需要考虑对蛋白样品灭菌过滤(使用 0.22 µm 过滤器),或者加入抑菌剂(例如 0.1% 叠氮化钠)以避免细菌生长。值得注意的是,并非所有蛋白质都能在 4°C 长时间保持稳定。3. 长期保存(一周以上)需要将蛋白样品冻存。
3 回答
9737 围观
3 回答
9737 围观
去回答
问
关于WB电泳的若干疑问
Eason老歌迷
第一个问题,我用过预制胶和自己配的胶,我个人还是更喜欢用自己配的,感觉效果更好,当然前提是你一定要混匀。第二个问题,小蛋白在转膜时一定要注意控制时间。一般湿转半个小时即可。
3 回答
665 围观
3 回答
665 围观
去回答
问
同一个细胞系提蛋白以后敷抗体显影显出背景很深,条带很杂……
Eason老歌迷
一个是你的封闭时间太短了。二个是你的抗体浓度过高。三个是你的有非特异性条带了,抗体特异性不高
3 回答
359 围观
3 回答
359 围观
去回答
问
各位大佬wb条带宽窄不一样什么原因
林夕娜娜
胶的问题,没有凝好,或者是没有混匀
3 回答
4598 围观
3 回答
4598 围观
去回答
问
Wb跑出来的条带背景很深,杂带很多的原因?
养点鱼吃火锅
3方面原因1.一抗浓度太高或抗体不好2.封闭不完全,时间不够3.洗脱时间次数不够。
4 回答
360 围观
4 回答
360 围观
去回答
问
好久没有科研了,问个小白问题,wb抗体哪家比较好的?一抗二抗,准备实验的。
养点鱼吃火锅
一般还是选择进口品牌,写到文章里受认可度更高,也不是说国产抗体都不好,也有质优价廉的国产抗体。进口品牌比如abcam,CST,thermo等。进口的也有可能效果不好,需要试一下。
5 回答
2407 围观
5 回答
2407 围观
去回答
问
蛋白条带总是粗粗的连在一起
balalaLy
就是蛋白量太大了,上样量减半吧
2 回答
367 围观
2 回答
367 围观
去回答
问
IP后的蛋白洗脱液有60ul,要跑WB的话用多少合适?
balalaLy
比如我用2个100cm皿的细胞拉的蛋白可以按照10ul左右的上样量跑,大多数蛋白都可以跑出来
5 回答
479 围观
5 回答
479 围观
去回答
问
《心血管病进展》杂志如何投稿
天一湖医者
根据您的描述,进入修改密码页面,那可能是浏览器问题,建议换一个浏览器。
1 回答
431 围观
1 回答
431 围观
去回答
问
求应用荧光分光光度计检测细胞内ph的方法
天一湖医者
近中性pH的检测BCECF及其膜渗透性AM酯是用于测量细胞内pH的最广泛使用的荧光pH指示剂。它的pKa约为6.98,非常适合测量各种细胞类型的胞质中的pH变化,以及监测近中性环境中的pH变化。BCECF在〜504 nm处有一个最大吸收,在〜440 nm处有一个等吸收点,在〜527 nm处有最大发射。尽管BCECF具有双重激发的比值特性,但一些特性使比值成像不理想。其等吸收点与最大激发之间距离较大
1 回答
719 围观
1 回答
719 围观
去回答
问
jurkat 免疫抑制
天一湖医者
可以用jurkat细胞进行体外免疫抑制模型,刺激时间 6h,按时间梯度取样,以 Caspase 3 抗体检测
1 回答
657 围观
1 回答
657 围观
去回答
问
96孔板铺板数量问题
伟点丽
细胞反复吹打对细胞活性也有一定的影响,单枪加平行孔之间会有偏差,可以用排枪加细胞悬液,保持平行孔的平行性
3 回答
1776 围观
3 回答
1776 围观
去回答
问
用bradford法定量蛋白的时候,用紫外分光光度计做线性的时候,相关系数总是做的不好,有没有相似经验的?
dxy_emzv2873
首先,实验习惯很重要,用枪的手法也是有标准的,可以去搜搜,保证稀释浓度准确。其次,样品用的什么溶剂,标准品也用什么溶剂溶解,保持一致。还有一点很重要,但是经常被忽视的:溶液里有些物质会对bradford法有影响。bradford法不受还原试剂的影响,样品中β–巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT浓度的可高达5mM。但会收到略高浓度的去垢剂的影响,需要确保SDS低于0.01%,Triton X-100低
3 回答
755 围观
3 回答
755 围观
去回答
问
WB实验时目的蛋白信号弱怎么办?
林夕娜娜
1.加大上样量2.使用高灵敏度的发光液。
4 回答
506 围观
4 回答
506 围观
去回答
问
想请教一下:CCK-8需要避光的原因?
balalaLy
避免试剂中的有效成分降解,但也不需要很严格避光,只要不是灯光正对着照就行。
3 回答
2898 围观
3 回答
2898 围观
去回答
问
买的抗体,说明书里图片显示目的条带只有一条,而自己做wb,却有多条带,什么原因呢?
balalaLy
有些时候是会这样,要调整一下抗体的浓度、稀释液、还有孵育时间。
6 回答
387 围观
6 回答
387 围观
去回答
问
用BCA法测蛋白浓度的时候总会存在调平失败的状况,有的时候甚至不如不调,有什么小技巧让调平更稳一些吗
balalaLy
如果组间蛋白量差异比较大的前提下用BCA法定量是会有比较大的误差,所以尽量取细胞数差不多的,或者组织重量相近的。
4 回答
1246 围观
4 回答
1246 围观
去回答
问
各位师姐师兄细胞传代冻存时间是怎样的?
申东熙老伯
冻存时间?意思是冻多久吗?如果是-80的话,细胞冻个一年第二年就不太行了,放在液氮可以放很久。
4 回答
709 围观
4 回答
709 围观
去回答
问
放线菌酮的浓度一般设置为多少? 最后拟合线性方程时,如果趋势更接近于曲线可以拟合为曲线方程吗?
guoyanli0000
一般设置0到200,可以拟合为曲线方程
3 回答
683 围观
3 回答
683 围观
去回答
1
•••
658
659
660
661
662
•••
1007
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序