丁香通
丁香园
论坛
医药招聘
丁香医生
更多
调查派
用药助手
丁香搜索
医药数据库
来问医生
我要登录
|
免费注册
|
我的丁香通
企业机构:
成为企业机构
个人用户:
个人中心
移动端
搜实验
大家都在搜
大家都在搜
0 人通过求购买到了急需的产品
免费发布求购
搜索
发布求购
实验专区
实验库(10000+)
实验问答
实验专题
热门视频
前沿资讯
科研者之家
丁香通
>
实验专区
>
实验问答
>
全部
实验问答
28,127,472 科研人在看
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
细胞BSA蛋白定量怎么调整啊,每次跑出来条带都歪?
天一湖医者
我觉得有两种可能:一、做胶时没有充分混匀二,上样buffer 可能有问题
3 回答
359 围观
3 回答
359 围观
去回答
问
wb同样的蛋白样品,跑三块胶,为什么有的内参齐,有的内参不齐?
天一湖医者
一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。
5 回答
947 围观
5 回答
947 围观
去回答
问
小白做+WB
天一湖医者
减少抗原上样量,降低一抗浓度,改变一抗孵育时间和温度
3 回答
327 围观
3 回答
327 围观
去回答
问
WB条带连一起是什么原因?
天一湖医者
wb时连成一条线可能有以下几种原因:1)上样量过大 这里指的是质量数过大,一般上样在20-100ug之间就可以,楼主可以减半上样量,试试看。2)一抗孵育时间过长,适当缩短孵育时间,也可以改善。3)一抗浓度过大 ,抗体如果很好用的话,增大稀释比例试试。4)曝光时间过长,同样会由此现象。但是这其中,上样量影响最大,建议楼主其他条件不动,减少上样量试试,可以减少一半。
6 回答
4592 围观
6 回答
4592 围观
去回答
问
WB背景很脏怎么办?
申东熙老伯
封闭久一点,可以用牛奶4℃封闭过夜,降低一抗浓度。
3 回答
1799 围观
3 回答
1799 围观
去回答
问
如何选择合适的分子伴侣
Eason老歌迷
我认为需要根据你要表达的真核蛋白的特性去选择相应的分子伴侣。常用的分子伴侣有Trx、GST、DsbA等,它们使得许多外源基因能在E.coli里正确折叠,如IL—11、IGFBP-3、INF、 Insulin甚至包括结构复杂的tPA等均可获得正确折叠的重组可溶性活性蛋白。
1 回答
1119 围观
1 回答
1119 围观
去回答
问
WB 转膜后的pvdf 膜保存。
秋秋欣欣
放在TBST 里4度保存,几天没有问题
5 回答
8080 围观
5 回答
8080 围观
去回答
问
免疫组化结果到底准不准?感觉DAB多染一会儿就阳性了
秋秋欣欣
免疫组化结果准啊,采图的时候肯定要对比着采图对照和阳性都需要看到,才能具有说服力
3 回答
462 围观
3 回答
462 围观
去回答
问
酵母双杂交Y2H在四缺培养基上有自激活的话,意味着就是自激活吗?
Eason老歌迷
是的是的。一般检测自激活就是将已知基因构建到可以表达BD结合结构域的载体上,表达形成融合诱饵蛋白(bait),将目标基因构建到可以表达AD激活结构域的载体上,表达形成融合猎物蛋白(prey)。如果诱饵蛋白和猎物蛋白发生互作,BD结合结构域和AD激活结构域在空间上极为接近,GAL4转录因子发生重构,恢复了转录因子的功能,可以激活报告基因的表达。通过检测报告基因的表达与否,从而推测猎物蛋白和诱饵蛋白是
1 回答
4029 围观
1 回答
4029 围观
去回答
问
trasnswell铺胶不均
秋秋欣欣
铺胶不均可以铺进去之后轻震几下
2 回答
487 围观
2 回答
487 围观
去回答
问
求助wb不出条带
Ryan_J
我们用的都是实验专用的脱脂牛奶,还有二抗可以降低些,不知道你的推荐浓度是多少,二抗我都是1:10000
4 回答
605 围观
4 回答
605 围观
去回答
问
真菌中的蛋白提蛋白过程中,留在上清的蛋白很少,通过WB甚至检测不出来,怎么做Coip?
秋秋欣欣
蛋白较少的还你就需要提高蛋白浓度,充分裂解,扩大真菌量
2 回答
484 围观
2 回答
484 围观
去回答
问
请问慢病毒感染细胞24h后换液加抗生素筛选细胞大片脱落的原因是?
balalaLy
我一般是24小时如果状态太差就换液,换液后第二天才加抗生素。如果状态好就补几ml培养基继续培养到第二上午换液,下午加抗生素。如果还是死很多细胞说明转染失败,重新包病毒吧
5 回答
2561 围观
5 回答
2561 围观
去回答
问
wb中的磷酸化蛋白要怎么跑,有没有什么特殊技巧,能跑的好看
秋秋欣欣
磷酸化的蛋白封闭的时候最好用5%BSA
5 回答
579 围观
5 回答
579 围观
去回答
问
枸杞木虱qPCR选择内参应该用什么啊? 急!!在线等!!
dxy_gwrp7ndq
ICG 数据库中收集了文献报道的各物种、组织细胞适用的内参基因。
3 回答
894 围观
3 回答
894 围观
去回答
问
困境-想研究脊髓神经元,但是缺乏脊髓神经元的细胞系(小鼠)
Eason老歌迷
有这篇文章,你可以参考一下。’大鼠海马神经元与小鼠脊髓发育过程中神经递质属性可塑性的研究’这篇文章是中科院一个研究生的。
1 回答
703 围观
1 回答
703 围观
去回答
问
细胞污染还是正常状态?求指点
秋秋欣欣
看你细胞状态挺好的,应该不是污染,可能就是培养基里的一些蛋白质
2 回答
719 围观
2 回答
719 围观
去回答
问
wb检测,使用B-actin归一化,还是使用用蛋白归一化准确?
秋秋欣欣
Wb检测应该使用内参归一化,可以是beta-actin
3 回答
1257 围观
3 回答
1257 围观
去回答
问
转膜时没有气泡,为什么显影的时候会有像气泡一样的空泡而且很大,确定不可能是转膜时有的
Eason老歌迷
转膜没有气泡,可能就是你敷抗体的时候出了问题,是不是你有一部分膜抗体没孵上啊。
5 回答
548 围观
5 回答
548 围观
去回答
问
CRISPR敲除导致基因组非目的基因丢失怎么办?
Eason老歌迷
我建议你如果有很多基因丢失,你必须要再做一次了。crispr方法会产生丢失现象,具体参看这篇文章,Paul Q. Thomas 等人在 Nature 发表的一篇题为:Large deletions induced by Cas9 cleavage 论文显示,CRISPR/Cas9切割后小鼠受精卵中出现频繁的大量碱基缺失(千碱基量级)
2 回答
485 围观
2 回答
485 围观
去回答
1
•••
655
656
657
658
659
•••
1009
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
领取干货资料
反馈
TOP
打开小程序