实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问配完浓缩胶，本来还好好的，有时凝了一段时间后，孔和孔之间的胶突然出现泡泡，然后就塌了，尤其是最靠两边的孔慢慢的就塌了，为什么？

Eason老歌迷

首先浓缩胶它本来就会随着时间浓缩缩小。我感觉你这个可能还是有点漏，玻璃板密封性不佳?

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问蛋白出现“笑脸”和“哭脸”条带的原因是为什么！

Eason老歌迷

出现笑脸哭脸的很大概率就是你制胶的时候没混匀。或者是电泳温度高了。

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问从超声纯化的蛋白怎么保存，可以放在负二十吗，可以放多久，如果制成wb的上样品，需要怎么保存？

天一湖医者

可以。1. 短期保存（24 小时内）大多数的蛋白质可以保存在 4°C。2. 在 4°C 超过 24 小时需要考虑对蛋白样品灭菌过滤（使用 0.22 µm 过滤器），或者加入抑菌剂（例如 0.1% 叠氮化钠）以避免细菌生长。值得注意的是，并非所有蛋白质都能在 4°C 长时间保持稳定。3. 长期保存（一周以上）需要将蛋白样品冻存。

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问关于WB电泳的若干疑问

Eason老歌迷

第一个问题，我用过预制胶和自己配的胶，我个人还是更喜欢用自己配的，感觉效果更好，当然前提是你一定要混匀。第二个问题，小蛋白在转膜时一定要注意控制时间。一般湿转半个小时即可。

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问同一个细胞系提蛋白以后敷抗体显影显出背景很深，条带很杂……

Eason老歌迷

一个是你的封闭时间太短了。二个是你的抗体浓度过高。三个是你的有非特异性条带了，抗体特异性不高

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问Wb跑出来的条带背景很深，杂带很多的原因？

养点鱼吃火锅

3方面原因1.一抗浓度太高或抗体不好2.封闭不完全，时间不够3.洗脱时间次数不够。

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问蛋白条带总是粗粗的连在一起

balalaLy

就是蛋白量太大了，上样量减半吧

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问胚胎裂解后怎么提取dna效果最好？

bamboopiggy

看你的实验目的啊，如果是做genotyping，可以直接加鼠尾裂解液就可以。如果想得到genomic DNA进行下一步的实验可以用试剂盒提取。

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问大家相互分享一些能查阅图书的网站？

Eason老歌迷

我一般喜欢去孔夫子旧书网，买书

2 回答364 围观

问《心血管病进展》杂志如何投稿

天一湖医者

根据您的描述，进入修改密码页面，那可能是浏览器问题，建议换一个浏览器。

1 回答356 围观

问原代树突状细胞7天后收集悬浮细胞重新种板后还需要再加细胞因子嘛

Eason老歌迷

肯定需要的，你都重新种板了，你要不加细胞因子，肯定不行。

2 回答210 围观

问请教下H9C2细胞培养相关问题

Eason老歌迷

你要是ct值这么大，肯定有问题。可能是模板量低或基因表达丰度低，建议增加模板量观察Ct值能否成相应倍数减少。或者qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低，建议通过标准曲线确认扩增效率。或者扩增产物过长，建议用三步法程序扩增或优化引物，扩增产物长度最好不超过300bp。或者体系中可能存在抑制剂影响酶的活性，建议梯度稀释模板或重新制备纯度更高的模板。你可以和你的同期讨论讨论。

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问求应用荧光分光光度计检测细胞内ph的方法

天一湖医者

近中性pH的检测BCECF及其膜渗透性AM酯是用于测量细胞内pH的最广泛使用的荧光pH指示剂。它的pKa约为6.98，非常适合测量各种细胞类型的胞质中的pH变化，以及监测近中性环境中的pH变化。BCECF在〜504 nm处有一个最大吸收，在〜440 nm处有一个等吸收点，在〜527 nm处有最大发射。尽管BCECF具有双重激发的比值特性，但一些特性使比值成像不理想。其等吸收点与最大激发之间距离较大

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问jurkat 免疫抑制

天一湖医者

可以用jurkat细胞进行体外免疫抑制模型，刺激时间 6h，按时间梯度取样，以 Caspase 3 抗体检测

1 回答558 围观

问96孔板铺板数量问题

伟点丽

细胞反复吹打对细胞活性也有一定的影响，单枪加平行孔之间会有偏差，可以用排枪加细胞悬液，保持平行孔的平行性

3 回答1645 围观

问用bradford法定量蛋白的时候，用紫外分光光度计做线性的时候，相关系数总是做的不好，有没有相似经验的？

dxy_emzv2873

首先，实验习惯很重要，用枪的手法也是有标准的，可以去搜搜，保证稀释浓度准确。其次，样品用的什么溶剂，标准品也用什么溶剂溶解，保持一致。还有一点很重要，但是经常被忽视的：溶液里有些物质会对bradford法有影响。bradford法不受还原试剂的影响，样品中β–巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT浓度的可高达5mM。但会收到略高浓度的去垢剂的影响，需要确保SDS低于0.01%，Triton X-100低

3 回答659 围观

问想请教一下：CCK-8需要避光的原因？

balalaLy

避免试剂中的有效成分降解，但也不需要很严格避光，只要不是灯光正对着照就行。

3 回答2745 围观

问各位师姐师兄细胞传代冻存时间是怎样的？

申东熙老伯

冻存时间？意思是冻多久吗？如果是-80的话，细胞冻个一年第二年就不太行了，放在液氮可以放很久。

4 回答613 围观

问放线菌酮的浓度一般设置为多少？最后拟合线性方程时，如果趋势更接近于曲线可以拟合为曲线方程吗？

guoyanli0000

一般设置0到200，可以拟合为曲线方程

3 回答614 围观

问实验统计问题，我这样应该用那种统计方法

Eason老歌迷

试验中有两个个因素改变，我觉得用双因素试验方差分析即可。

2 回答460 围观

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