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科研学霸天团,48小时有问必答
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WB提取蛋白后,样本要如何保存
whilt-shirt
提完蛋白后一部分煮好放-20,一个月内有效,剩下未煮的直接放-80,半年内有效
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问
做RNA转染实验时铺板的时候需要在无RNA酶的环境下操作吗
whilt-shirt
需要的,RNA酶会裂解RNA导致转染效率低或者失败
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问
提取细胞蛋白时,浓度低如何解决
whilt-shirt
100mm的dish是可以加400-600ul的裂解液的,是不是细胞没刮导致浓度比较低
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问
293t细胞裂解液的选择
Eason老歌迷
用sds配吗?150 mM NaCL+ 1% NP-40 (去垢剂) + 0.1% SDS (去垢剂)+2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)+2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)或1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)+1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)+1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)
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问
磁珠偶联抗体时发现抗体有析出,颗粒样,最后信号偏低怎么办
Eason老歌迷
注意反应体系浓度,说简单点就是反应体积大点,蛋白浓度不要太高,太高也容易出现沉淀,况可能和静电有关。
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问
免疫组化的冰冻切片前期处理
whilt-shirt
理论上是不可以的,会影响实验结果
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问
请教各位大神,在细胞实验里,怎么确定肿瘤细胞表面的受体和和它的中和抗体发生反应,
Eason老歌迷
最近在看这方面的文章,抗药抗体中的中和抗体能够通过直接与药物作用结合位点结合,或者通过空间位阻的作用,使药物失去与其靶点结合的能力,从而封闭、中和药物的治疗活性。免疫原性检测、评价可以做到。
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问
PBS灭菌后可以放多久?
whilt-shirt
灭菌后要及时封口,理论上1个月没啥问题
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问
复苏了一瓶caco2细胞,长得很慢是正常的吗?我用的是DMEM高糖培养基➕10%的血清
Eason老歌迷
当然不正常了!caco-2细胞比较难消化,如果不消化成单个细胞就会长不好,建议用分步消化,用胰酶消化下来一些就移去离心管再加胰酶消化直到完全消化下来。
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问
WB转膜问题,哪里出了问题呢?
申东熙老伯
转膜之前膜有没有在甲醇里活化呢?Western转膜液最好放在冰箱,天气热。
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问
帮忙看一下这个细胞是怎么了,新复苏的细胞突然长出来这种乳白色凸起的点,这是咋了?
whilt-shirt
有可能是污染了,建议降培养箱重新灭菌后再试试
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问
细胞培养,求问是不是黑胶虫污染
balalaLy
有污染的话细胞内外都会有黑点,如果只是细胞内有,就应该是细胞状态不好,消化过久或者老化
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问
小鼠骨髓内皮祖细胞培养纯度不高
Eason老歌迷
周围的杂细胞还存在,可能是消化时间不够引起的。每种细胞消化时间都不一样,得自己摸索条件。加入胰酶后,注意观察细胞,在细胞开始收缩的适当时间里就得及时终止,否则对细胞损伤很大。也不能太短,太短还没有消化完全,会容易导致细胞老化,生长不好。
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问
ARK1B1条带有时能曝出来有时曝不出来怎么办?
inventbiotech
从结果来看,是转膜的问题,优化转膜条件,但是有没有是因为蛋白样品,ARK1B1蛋白在样本中丰度如何,丰度不高建议针对蛋白所在的亚细胞结构进行分离富集,增加上样量。
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问
蛋白酶 k的单位换算
Eason老歌迷
你是不是理解错了。U是酶活单位,意思为在一般情况下,1分钟内转化1微摩尔底物所需的酶量为1U,即1 U=1 微摩/分钟,试剂包装上应该有相应质量,即该质量药品所具有的酶活。例如10 mg的蛋白酶标注为25000 U,就代表每毫克蛋白酶具有2500 U的酶活,即每毫克蛋白酶每分钟可以催化2500 微摩蛋白。
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问
wb呈现的结果电泳跑道很明显是为什么。
inventbiotech
样品上样前离心去除杂质,,上样量要控制一下,基本可以解决这个问题
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问
转录因子要不要提核蛋白?
Eason老歌迷
提蛋白得用核蛋白提取试剂盒。它入核了
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问
痰标本处理疑惑
Eason老歌迷
以下为定值的判断条件:一个合格的痰标本,应该满足白细胞大于25,上皮细胞小于10,得出的结果才有意义。
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问
BD流式软件与Flowjo
Eason老歌迷
是不是没设置好,我感觉好像是初始化了,没调试好
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问
巯乙醇酸钠培养基配置
Eason老歌迷
给你分享一下我们实验室的巯乙醇酸钠培养基配方:示蛋白胨 10.0g,牛肉浸粉 17.5g,葡萄糖 5.0g,氯化钠 5.0g,磷酸氢二钾 2.0g,硫乙醇酸钠 0.5g,亚甲蓝 0.002g,琼脂 0.5g,pH7.2±0.2(25℃) 。
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